【摘要】： 感受態(tài)是細菌完成對外源DNA轉(zhuǎn)化的重要且一過性生理過程，轉(zhuǎn)化的結(jié)果是細菌攝取外來DNA后其遺傳特征發(fā)生變化。肺炎鏈球菌(Streptococcus pneoumoniae,S.pn)是一種條件致病菌，其條件致病性可能與它在體內(nèi)發(fā)生自然轉(zhuǎn)化有關(guān)，但目前尚未見到研究這方面關(guān)系的相關(guān)報道。有報道當S.pn進入感受態(tài)后，可啟動一些蛋白如自溶素的表達，而自溶素是S.pn的一種較重要的毒力因子，提示細菌的轉(zhuǎn)化與毒力基因表達有一定關(guān)系。目的研究體外實驗是否誘導(dǎo)S.pn的轉(zhuǎn)化過程，探討S.pn毒力因子的表達是否與環(huán)境誘導(dǎo)細菌感受態(tài)形成與轉(zhuǎn)化過程有關(guān)。方法 1)用臨床分離的肺炎鏈球菌誘導(dǎo)感受態(tài)的產(chǎn)生并制備感受態(tài)缺陷菌。操縱子comCDE為S.pn感受態(tài)唯一共同調(diào)控點，comE編碼此操縱子的效應(yīng)蛋白，用插入失活的方法使comE斷裂來使整個comCDE操縱子失活，從而得到感受態(tài)缺陷菌。2)感受態(tài)缺陷菌與野生菌在誘導(dǎo)感受態(tài)的環(huán)境中培養(yǎng)，測定毒力因子的表達量。本實驗分作兩組，一組是 重慶醫(yī)科火學(xué)碩士學(xué)位論文 實驗組即感受態(tài)完整的野生菌在PH8．0的CTM中生長，另一組是感受態(tài) 缺陷菌PH8．0的CTM中生長，把PH6．8的CTM中生長的菌作為陰性對照。 分別在生長的不同時間點提取RNA，最后采用rea卜time RT—PCR來定量 測定各種毒力因子mRNA表達的水平。采用內(nèi)標法排除操作誤差，又同 時采用標準曲線法使結(jié)果精確定量。本實驗所測的毒力因子有自溶酶、 溶血素、膽堿結(jié)合蛋白、S工gA、神經(jīng)氨酸酶、透明質(zhì)酸酶。另外還作了 comC的表達測定，從基因水平確定感受態(tài)的發(fā)生。 結(jié)果S．pn在自然 條件下轉(zhuǎn)化時，培養(yǎng)后吸光度到0．08左右時加入DNA，在細菌OD㈣。為 0．54左右時，得到轉(zhuǎn)化菌落。同時測得當細菌OD訓(xùn)。。在0．044到0．127 之間corn(：的表達最大，從細菌培養(yǎng)和基因表達水平兩方面都表明這期間 感受態(tài)的形成，白溶酶、神經(jīng)氨酸酶、透明質(zhì)酸酶三種毒力因子的表達 也從這時開始迅速增高且隨著培養(yǎng)時間的不同，表達在量上存在差異； 野生菌組表達明顯高于缺陷菌組，成組設(shè)計資料兩均數(shù)間比較的t檢驗 t值分別為2．96(P0．05)、2．8(P0．05)、4．56(P0．05)。 結(jié)論細菌 感受態(tài)能啟動自溶酶、神經(jīng)氨酸酶、透明質(zhì)酸酶三種毒力因予mRNA的 表達，提示S．pn的感受態(tài)能促進其毒力因子的表達。
【圖文】：

圖216srRNA的電泳圖外部標準標準曲線的制作表10標準品不同濃度所對應(yīng)的螢光強度濃度(。g/。1)循環(huán)素10一34.4710一J8.5310一。15.5210’18.5410一820.02e孵lenumb.IOJ10悶10一氣l。石一l。-圖3外標用的標準曲線10一Epg/pl)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R378.1

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本文編號：2653818