【摘要】： 目的 表達(dá)并純化含有衛(wèi)氏并殖吸蟲(肺吸蟲)原組織蛋白酶L基因(Pw1)的重組細(xì)菌Pw-1／pRSETB／BL21，用純化產(chǎn)物以ELISA檢測肺吸蟲病患者、其它寄生蟲病患者和正常人血清，評價(jià)其敏感性，特異性和應(yīng)用前景。方法 通過異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)重組菌表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳，，以衛(wèi)氏肺吸蟲成蟲抗原免疫兔、正常兔、感染犬和正常犬、肺吸蟲病患者和血吸蟲病患者以及正常人血清做Western blot檢測比較，以分步洗滌和透析等方法對表達(dá)產(chǎn)物包涵體進(jìn)行純化，純化產(chǎn)物經(jīng)氧化／還原型谷胱苷肽復(fù)性后即為重組蛋白抗原。用該重組蛋白抗原，以ELISA法檢測肺吸蟲、血吸蟲、華支睪吸蟲、囊蟲和包蟲病人以及正常人血清中相應(yīng)抗體，并與衛(wèi)氏肺吸蟲粗抗原做比較。結(jié)果 重組菌的沉淀于約32ku處出現(xiàn)特異性蛋白條帶，該條帶只被衛(wèi)氏肺吸蟲成蟲抗原免疫兔、感染犬和衛(wèi)氏肺吸蟲病患者血清所識別。經(jīng)純化復(fù)性后的重組蛋白32Ku包板做ELISA檢測。結(jié)果顯示，粗抗原特異性較差，其與其他寄生蟲病患者和正常人血清交叉反應(yīng)率分別為：血吸蟲病11.43％，華支睪吸蟲病4.84％，囊蟲病3.22％，包蟲病5.88％，正常人亦有6.67％的假陽性反應(yīng)；而本研究所制備的重組蛋白抗原與上述患者及 南京醫(yī)科大學(xué)頎士學(xué)位論文 正常人血清均無交叉反應(yīng)，表明該重組蛋白抗原應(yīng)用于肺吸蟲病的免 疫診斷特異性較高。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R392

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本文編號：2653769