【摘要】：報道了畢赤酵母表達人白細胞介素 11的下游工藝研究 ,并對其產(chǎn)物進行了分析鑒定。所用工藝流程為離心收集上清、超濾濃縮脫鹽、離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾。所得產(chǎn)物經(jīng)SDS PAGE電泳、RP HPLC分析、N端和C端序列分析、質(zhì)譜、等電點分析和生物學(xué)活性分析 ,結(jié)果表明 :產(chǎn)品純度大于 97% ,結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與E .coli融合表達的Neumega完全一致
【圖文】：

對于罐上發(fā)酵,為縮短培養(yǎng)時間,減小因為表達外源蛋白導(dǎo)致的對重組菌株的選擇壓力,rhIL-11發(fā)酵分兩階段進行。首先,在以甘油為唯一碳源的合成培養(yǎng)基中增殖菌體,等甘油耗盡后再加甲醇誘導(dǎo)IL-11基因表達。另外實驗證明在中性pH下rhIL-11表達水平不高(蛋白酶降解),因此將甲醇誘導(dǎo)階段的pH降低以抑制蛋白酶對分泌表達產(chǎn)物的降解。誘導(dǎo)至72h以上表達到達最高峰,放罐,此時菌濃度OD600≥200,上清液中rhIL-11表達量經(jīng)SDS-PAGE分析大于0·4g/L。圖1為JYIL4菌種罐上培養(yǎng)菌密度與rhIL-11表達量的關(guān)系圖。

rhIL-11純度鑒定

【共引文獻】

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本文編號：2649497