【摘要】：報(bào)道了畢赤酵母表達(dá)人白細(xì)胞介素 11的下游工藝研究 ,并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行了分析鑒定。所用工藝流程為離心收集上清、超濾濃縮脫鹽、離子交換層析、疏水層析、凝膠過(guò)濾。所得產(chǎn)物經(jīng)SDS PAGE電泳、RP HPLC分析、N端和C端序列分析、質(zhì)譜、等電點(diǎn)分析和生物學(xué)活性分析 ,結(jié)果表明 :產(chǎn)品純度大于 97% ,結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與E .coli融合表達(dá)的Neumega完全一致
【圖文】：

對(duì)于罐上發(fā)酵,為縮短培養(yǎng)時(shí)間,減小因?yàn)楸磉_(dá)外源蛋白導(dǎo)致的對(duì)重組菌株的選擇壓力,rhIL-11發(fā)酵分兩階段進(jìn)行。首先,在以甘油為唯一碳源的合成培養(yǎng)基中增殖菌體,等甘油耗盡后再加甲醇誘導(dǎo)IL-11基因表達(dá)。另外實(shí)驗(yàn)證明在中性pH下rhIL-11表達(dá)水平不高(蛋白酶降解),因此將甲醇誘導(dǎo)階段的pH降低以抑制蛋白酶對(duì)分泌表達(dá)產(chǎn)物的降解。誘導(dǎo)至72h以上表達(dá)到達(dá)最高峰,放罐,此時(shí)菌濃度OD600≥200,上清液中rhIL-11表達(dá)量經(jīng)SDS-PAGE分析大于0·4g/L。圖1為JYIL4菌種罐上培養(yǎng)菌密度與rhIL-11表達(dá)量的關(guān)系圖。

rhIL-11純度鑒定

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張穎,劉燦輝,劉玉樂(lè),田波;人白細(xì)胞介素11cDNA的克隆、融合表達(dá)及活性測(cè)定[J];生物工程學(xué)報(bào);2000年03期

2 杜秋江,馬雁冰,劉紅巖,陳爾佳,周麗,姬秋彥,李智華,徐維明,孫茂盛,戴長(zhǎng)柏;人白細(xì)胞介素11的基因克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);1999年06期

3 張穎,劉玉樂(lè),田波;人白細(xì)胞介素11融合蛋白切割位點(diǎn)的改變及成熟蛋白的純化[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2000年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 解福生;龐甲佩;劉海峰;;重組人白介素-11研究進(jìn)展[A];山東省藥學(xué)會(huì)第一屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下）[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 郭錫杰;家蠶核型多角體病毒ptp基因分析與利用桿狀病毒表達(dá)人白細(xì)胞介素-11的研究[D];浙江大學(xué);2001年

2 黃鶴;牛腸激酶催化亞基cDNA的克隆、表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的純化和應(yīng)用[D];天津大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 唐水泉;重組人白細(xì)胞介素-11發(fā)酵的模型和實(shí)驗(yàn)研究[D];天津大學(xué);2006年

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫麗麗;王超群;;雙歧桿菌的分離與鑒定[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊);2011年07期

2 朱巍巍;李楊;朱萬(wàn)琴;王艷華;冀寶贏;孫翠煥;;Enterococcus faecalis RQ15產(chǎn)低溫中性蛋白酶的純化及酶學(xué)性質(zhì)[J];食品科學(xué);2011年11期

3 李世元;付晉鳳;;豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞常用檢測(cè)方法[J];中華損傷與修復(fù)雜志(電子版);2011年01期

4 陳來(lái)琳;曾琳;柯林;;一株兼具砷氧化還原功能微桿菌的篩選和鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年21期

5 樓許柏;馬章林;;脈沖場(chǎng)凝膠電泳在沙門(mén)菌鑒定中的應(yīng)用[J];海南醫(yī)學(xué);2011年15期

6 姚淑紅;;雞金黃色葡萄球菌的分離鑒定[J];山東畜牧獸醫(yī);2011年08期

7 牛莉娜;王英;饒朗毓;裴華;彭江龍;陳錦龍;呂剛;林英姿;;一株具有免疫增強(qiáng)活性的海南紅樹(shù)林真菌WC1016的分類(lèi)鑒定[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年08期

8 李曉玲;張?zhí)?張中義;楊化七;滕學(xué)瓊;;我國(guó)黑痣菌屬三個(gè)新記錄種(英文)[J];菌物學(xué)報(bào);2011年05期

9 吳慧昊;段龍飛;張園園;牛鋒;;熊貓糞便中乳酸菌的分離鑒定與降膽固醇作用研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年11期

10 郭艷瓊;吳�；�;宣濤;張建珍;郭亞平;馬恩波;;中華稻蝗谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶的分離純化[J];應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2011年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉清津;葉俊華;楊松濤;夏咸柱;諶南輝;;犬細(xì)小病毒NJ-04株的分離與初步鑒定[A];第十三次全國(guó)養(yǎng)犬學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 段莎麗;孫亞琴;伍陽(yáng);龍用波;謝晴;鄧仕槐;;兩株耐堿性亞硝化細(xì)菌的初步鑒定和特性研究[A];第二屆全國(guó)農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 馬艷;和春英;羅瓊;趙雁;曾千春;張?zhí)?張中義;;中國(guó)炭疽菌屬(Colletotrichum)的分類(lèi)研究Ⅳ[A];中國(guó)植病、菌物學(xué)會(huì)杭州聯(lián)合年會(huì)論文集[C];2008年

4 游銀偉;尤升波;岳壽松;;產(chǎn)角蛋白酶芽孢菌YYW-1的鑒定及產(chǎn)酶性質(zhì)分析[A];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)第二屆特種醫(yī)學(xué)暨河南省、山東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 黃恩毅;陳偉;楊力;楊恬;;免疫磁珠法純化大鼠CD34~+毛囊干細(xì)胞[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨青年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2007年

6 孫婧;翟廣書(shū);李璐;何濱;駱文茹;江桂斌;;砂海螂體內(nèi)錫結(jié)合蛋白及其高富集有機(jī)錫機(jī)理的研究[A];第五屆全國(guó)環(huán)境化學(xué)大會(huì)摘要集[C];2009年

7 沈奇;顧龔平;張衛(wèi)明;吳國(guó)榮;;植物綠原酸的研究動(dòng)態(tài)[A];中醫(yī)藥現(xiàn)代化與科技創(chuàng)新高層論壇暨第二屆金陵名醫(yī)論壇論文集[C];2007年

8 彭黎;梁宋平;;一種新型虎紋毒素的表達(dá)純化及功能探索[A];第八屆中國(guó)生物毒素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2007年

9 黃進(jìn);;轉(zhuǎn)基因馬鈴薯表達(dá)體系中人白細(xì)胞介素-12的純化及生物學(xué)活性的鑒定[A];第九屆西南三省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

10 溫見(jiàn)翔;吳少庭;陳群;秦莉;袁仕善;雷明軍;潘暉榕;林綺萍;張仁利;高世同;黃達(dá)娜;;結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白的表達(dá)與純化[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)熱帶病與寄生蟲(chóng)學(xué)分會(huì)機(jī)會(huì)性感染學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳靜;嗜熱毛殼菌熱穩(wěn)定糖化酶純化及其編碼基因的克隆與表達(dá)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 張?jiān)迫A;灰葡萄孢菌激活蛋白的純化、基因克隆與功能研究[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 李華;嗜熱毛殼菌（Chaetomium thermophilium）熱穩(wěn)定性β-1，3-葡聚糖酶的純化特性及cDNA克隆[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 吳利先;屎腸球菌毒力基因hyl的鑒定和功能研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

5 郭潤(rùn)芳;疏綿狀嗜熱絲孢菌熱穩(wěn)定幾丁質(zhì)酶純化及其編碼基因的克隆與表達(dá)[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 常維山;腎型雞傳染性支氣管炎病毒的鑒定及其S_1基因核酸分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);1997年

7 穆楊;MATSA的分離純化及其單克隆抗體的研制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

8 陳立志;牛源致病性壞死梭桿菌分離鑒定及其白細(xì)胞毒素免疫特性研究[D];吉林大學(xué);2008年

9 黃瑩;狂犬病病毒CTN株反向遺傳系統(tǒng)的建立[D];吉林大學(xué);2009年

10 王鵬;一種耐藥變形桿菌的分離、鑒定及其免疫學(xué)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 葉德萍;膽固醇氧化酶產(chǎn)生菌Enterobacter sp.的篩選及其酶分離純化的研究[D];四川師范大學(xué);2008年

2 薛東紅;短短芽孢桿菌XDH的鑒定及其抗菌物質(zhì)的分離、純化與部分性質(zhì)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

3 嚴(yán)勝平;CP5型金黃色葡萄球菌莢膜多糖的提取純化與鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 周玉長(zhǎng);中國(guó)1995～2004年雞傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定及致病性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

5 宋影;Armillariella tabescens EJLY2098β-甘露聚糖酶47K的生產(chǎn)、純化及性質(zhì)與79K（P2）的基因克隆[D];暨南大學(xué);2007年

6 戚亭;兩株豬細(xì)小病毒的分子特征及其主要蛋白的原核表達(dá)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

7 徐宗香;口蹄疫病毒VP2蛋白B細(xì)胞線(xiàn)性表位的鑒定[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 張艷艷;禽腦脊髓炎病毒的鑒定與弱毒疫苗的研制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

9 崔曉華;豬圓環(huán)病毒2型吉林株的分離與鑒定及ORF2基因序列分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 張靜;產(chǎn)1，3-丙二醇的乳酸菌的分離、鑒定及1，，3-丙二醇氧化還原酶基因的克隆[D];四川大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2649497