【摘要】：目的 分別使用布法羅大鼠肝細(xì)胞(Buffalo rats liver，BRL)條件培養(yǎng)基、鼠胚成纖維細(xì)胞(Mouse embryonic fibroblast，MEF)飼養(yǎng)層體外培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ESCs)，并使用不同分化誘導(dǎo)物對(duì)ESCs分化為心肌細(xì)胞施加影響，以篩選理想的高效定向培養(yǎng)及分化方案。 方法 分別用BRL條件培養(yǎng)基和MEF飼養(yǎng)層兩種培養(yǎng)方法培養(yǎng)ESCs，以抑制ESCs分化并保持其增殖。當(dāng)ESCs增殖到足夠數(shù)量時(shí)撤除MEF飼養(yǎng)層和BRL條件培養(yǎng)基，以維甲酸(retinoic acid，RA，2nmol／L)、二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO，，0.6％)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β_1(transforming growth factor-β_1，TGF-β_1，2ng／ml)、激活素-A(activin-A，20ng／ml)為分化誘導(dǎo)劑加入分化培養(yǎng)基中，組合成六種分化培養(yǎng)基，分別為無(wú)誘導(dǎo)物組、TGF β_1組、activin-A組、RA+DMSO組、TGFβ_1+DMSO組、TGF β_1+activin-A組，采用懸滴、懸浮、貼壁三步法誘導(dǎo)ESCs分化為心肌細(xì)胞。經(jīng)光鏡觀察、透射電鏡分析及免疫細(xì)胞化學(xué)染色，以出現(xiàn)自發(fā)性收縮活動(dòng)且心肌細(xì)胞特異結(jié)構(gòu)蛋白免疫染色陽(yáng)性的懸滴計(jì)為分化成功。計(jì)數(shù)各組分化成功的懸滴數(shù)，計(jì)量資料以x±s表示，組間比較用方差分析及t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有顯著性，比較各組分化比率。 結(jié)果 (1) BRL條件培養(yǎng)基及MEF飼養(yǎng)層兩種培養(yǎng)方法均能促進(jìn)ESCs增殖并抑制其分化，ESCs呈巢狀集落生長(zhǎng)。(2) 六組分化誘導(dǎo)條件均能使ESCs分化為心肌細(xì)胞，以MEF飼養(yǎng)層法培養(yǎng)和BRL條件培養(yǎng)法培養(yǎng)的ESCs在六組分化誘導(dǎo)物作用下分化比率分別為無(wú)誘導(dǎo)物組(23.1±2.58％ vs 30.5±1.29％)、TGF-β_1組(61.2±3.21％ vs 68.5±2.65％)、activin-A組(58.5±2.26％ vs 65.3±1.71％)、RA+DMSO組(62.8±3.97％ vs 70.8±2.71％)、TGF-β_1+DMSO組(71.2±3.96％ vs 76.0±2.94％)、TGFβ_1+activin-A組(81.8±4.06％ vs 92.8±2.22％)。(3) 以BRL條件培養(yǎng)法培養(yǎng)的ESCs在六組分化比率均顯著高于MEF飼養(yǎng)層法(P＜0.01)；在六種誘導(dǎo)條件之間比較，以TGF-β_1+activin-A組的分化率最高(P＜0.001)。 結(jié)論 以BRL條件培養(yǎng)基培養(yǎng)，TGF-β_1+activin-A組合是一種理想的ESCs體外分化體系。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉蘭英,楊琨,朱振宇,劉玉川,余細(xì)勇,銀巍,湯建,馬澗泉,顧軍;胚胎干細(xì)胞體外分化為心肌細(xì)胞誘導(dǎo)因素的探討[J];中國(guó)病理生理雜志;2000年05期

本文編號(hào)：2645570