【摘要】： 目的 1)應用新生大鼠離體延髓腦片標本，記錄與之相連的舌下神經(jīng)呼吸節(jié)律性放電(respiratory rhythmical discharge activity，RRDA)，在灌流液中分別給予不同濃度的NO(nitric oxide，NO)供體硝普鈉(sodium nitropmsside，SNP)，NO合成前體L-精氨酸(L-Arginine，L-Arg)以及神經(jīng)元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)特異性抑制劑7-nitro indazole (7-NI)，觀察其對RRDA的影響，從而探討NO對節(jié)律性呼吸的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)中的作用；2)在新生大鼠離體延髓腦片標本上，同步記錄舌下神經(jīng)根和面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)(the medial area of retrofacialis nucleus，mNRF)中的吸氣神經(jīng)元的放電活動，分別給以NO的合成前體、供體以及nNOS的特異性抑制劑，進一步探討NO對節(jié)律性呼吸產(chǎn)生影響的可能機制。 方法 選用新生SD大鼠(0～3d)，雌雄不拘。1)參照并改良Suzue的方法制作離體延髓腦片標本，主要包含面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)，前包欽格氏復合體(Pre-B(?)tzinger Complex)、腹側(cè)呼吸組以及背側(cè)呼吸組的一部分，保留舌下神經(jīng)根。用玻璃吸附電極記錄舌下神經(jīng)放電作為呼吸活動的指標，主要的呼吸參數(shù)包括呼吸周期(respiratory cycle，RC)、吸氣時程(inspiratory time，TI)、呼氣時程(expiratory time，TE)以及放電的積分幅度(integral amplitude，IA)，通過灌流液給藥，觀察不同濃度的不同藥物對神經(jīng)根放電活動的影響；2)在面神經(jīng)后核內(nèi)側(cè)區(qū)(mNRF)同步記錄吸氣神經(jīng)元單位的放電活動，灌流給予上述不同藥物藥物，觀察其對吸氣神經(jīng)元放電的影響。 結(jié)果 1在記錄神經(jīng)根的實驗部分：1)灌流給予不同濃度的NO合成前體L-Arg(從500μmol/L到2mmol/L)，與給藥前對照相比，舌下神 經(jīng)根的各項放電指標均未出現(xiàn)顯著性變化;2)灌流給予不同濃度的NO 供體sNP(濃度100腳。UL~2~1幾)，不論給予上述任何濃度的SNP， 舌下神經(jīng)根放電指標與對照相比都未出現(xiàn)明顯變化;3)灌流給予不同濃 度的nNOs的特異性抑制劑7一I(500娜ol/L~2~ol幾)后，Rc、TE 無顯著性變化，而隨著給藥時間的逐漸延長，TI和IA均同時出現(xiàn)逐漸 的下降的趨勢:500娜。比7一I實驗組，正常MKS液灌流時TI為1.39 士0.055、I^為1387.00士65.16林V·ms，給藥后第smin時Tl為1.01士 0 .055、I^為1274.00士55.82”V·ms(p0.05)，第10min時TI為0.89士 0.055、IA為1218.00士55.34釁·ms(p0 .05);lmmo比的7一I實驗組， 正常對照組Tl為1.01士0.185、IA為1642.83士226.90四.ms，給藥后 Slnin，Tl為0.87士 0.145、認為1528.43士189.02四·ms(P0 .05)，10rliln 時，Tl為0 .37士0.125、IA為1278.83士180.92四.ms(P0 .05);Znnno譏 7一I實驗組，，正常對照的TI為1.17士0.065、IA為1356.00士65.16四·ms， 給藥后smin時，Tl為0.87士0.055、IA為1190.00士57.82釁.ms(P0 .05)， 給藥10min時，Tl為0.32士0.035、IA為966.00士58.34四.ms(’I’0 .05)。 7一I的濃度和這種抑制作用還存在量效關(guān)系，10min時，給予500洲mo比 Tl下降約36%，IA下降12%，Inuno比時TI下降63%，IA下降22%， 2~泥時Tl下降73%，IA下降28%;4)單純給予相應濃度的7一I 溶劑二甲亞礬(d如ethyl sulfoxide，DMSO)后，舌下神經(jīng)根放電活動 無顯著性變化。 2同步記錄舌下神經(jīng)根和mNRF區(qū)吸氣神經(jīng)元放電活動的實 驗:l)給藥前，正常MKS灌流時，吸氣神經(jīng)元放電的平均頻率為 25.39士5.04次HZ，放電時程為0.5811士0.02975;2)先后分別給予L一A飛、 SNP之后，吸氣神經(jīng)元放電的平均頻率分別為26.79士5.llHz和 26.43土5.02Hz，放電時程分別為0.5733士0.02535和0.5628士0.02655，與 對照相比平均頻率和放電時程并無顯著性變化(卜0.05);3)給予nNOS 特異性抑制劑7一I之后，吸氣神經(jīng)元的放電時程為0.1894士0.02475，平 均頻率為17.58士4.78HZ，和對照相比均顯著性下降(P0 .05)，分別下 降67.4%和30.8%:4)灌流給予上述三種試劑后，TE均未發(fā)生明顯變 化。 結(jié)論1.NO對節(jié)律性呼吸中吸氣活動的抑制作用參與了吸氣中止 機制;2.NO對呼吸強度和呼吸頻率均有調(diào)節(jié)作用，但對前者的作用更 為重要;3.在NO對基本節(jié)律性呼吸的調(diào)節(jié)過程中，主要由神經(jīng)元合成 并釋放的內(nèi)源性NO就可能滿足其對節(jié)律性呼吸的調(diào)節(jié)功能的需要，而 外源性NO，則可能由于對其需要量不大，或由于其半衰期過短，所以 在呼吸調(diào)節(jié)中的作用不大;4.NO對mNRF中吸氣神經(jīng)元的放電時程和 放電平均頻率有明顯的抑制作用，提示NO對吸氣中止機制的影響，可 能是通過對mN盯的吸氣神經(jīng)元的作用而實現(xiàn)的。
【學位授予單位】：中國人民解放軍第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R338

【參考文獻】

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本文編號：2644068