【摘要】：背景與目的：丙型肝炎是一種流行較為廣泛的病毒性疾病，是一個對社會及經(jīng)濟有重要影響的全球問題。據(jù)估計，，全球有1.7億人口，即全世界3％左右的人口感染了丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)(世界衛(wèi)生組織)。HCV歸屬黃病毒科(Flaviviridae family)的嗜肝病毒屬，與其他RNA病毒一樣，HCV在復制過程中由于缺乏有效的修復機制，故易發(fā)生變異，逃避宿主免疫監(jiān)視，因無有效疫苗，其感染率呈上升趨勢。按其基因組序列異質性程度高低可分基因型(30％)、亞型(20％)及分離株(10％)。不同的基因型其慢性化程度及對干擾素的反應等也不盡相同。目前實驗室檢測HCV常用免疫學方法和PCR方法，前者檢測靈敏度有一定的局限性，如血清中抗原濃度過低或抗體尚未產(chǎn)生(即“窗口期”)會檢測不出，若想診斷出大量基因型，此方法更顯得無力；PCR方法檢測雖可以縮短“窗口期”，但對基因型的檢測不僅操作煩瑣、費時，且很難實現(xiàn)。本研究目的在于研制一種DNA芯片，通過雜交，尼龍膜顯色方法，達到快速、經(jīng)濟、靈敏、準確檢測HCV及其基因型的目的。 方法：本研究采取的方法是依據(jù)基因型的核酸一級結構序列設計相應的探針，然后將合成好的寡核苷酸探針用點樣儀點于玻璃片表面，制成DNA芯片，通過雜交，尼龍膜顯色方法進行檢測HCV及其基因型。 首先，構建了7個含丙型肝炎基因型的標準質粒，包括1a、1b、2a、2b、3a、3b、6a。以這些標準質粒作為實驗的材料及參照。 根據(jù)HCV 5′端非編碼區(qū)(5′NCR)設計特異型探針和引物，制作DNA芯片。在實驗過程中，我們對PCR條件、雜交條件以及顯色條件等進行了優(yōu)化。 實驗組為60份HCV RNA陽性血清，對照組為20份健康人血清。獲得目的片 鄭州大學2004屆碩士學位論文 段后與芯片雜交，最后通過尼龍膜上的顯色信息判讀基因型。同時以測序法進行雙 盲HCV基因分型對照檢測。 結果:實驗組HCV芯片檢測結果均為陽性，對照組均為陰性。實驗組基因分型 檢測結果與測序結果二者符合率為%.7%。 結論:表明用基于膜顯色結果判讀的DNA芯片來檢測HCV基因分型具有快 速、經(jīng)濟、高特異性和高靈敏度的特性，可以應用于HCV及其基因分型臨床檢測。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 施錦杰;基因芯片技術在病毒性肝炎檢測中的應用與展望[J];國外醫(yī)學(臨床生物化學與檢驗學分冊);2002年04期

2 陸志檬，張東華，童葵塘，高健，白敬羽，徐伯忠;HCV基因型和病毒量與干擾素療效的關系[J];中華傳染病雜志;1995年02期

3 鄭懷競;生物芯片技術在病毒性肝炎診斷中的應用[J];中華肝臟病雜志;2002年04期

本文編號：2636062