【摘要】：目的 研究采用低密度基因芯片對(duì)人不同腫瘤細(xì)胞中的糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族進(jìn)行表達(dá)譜分析。方法 通過(guò)斑點(diǎn)雜交確立以膜為基礎(chǔ)的分子雜交技術(shù)，以此為基礎(chǔ)，建立N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶基因家族芯片，采用NBT和BCIP顯色法與本室已有化學(xué)發(fā)光法結(jié)果比較其靈敏度差異及可行性，再通過(guò)TOPO-TA克隆、PCR、RT-PCR、分子標(biāo)記和相應(yīng)顯影系統(tǒng)等技術(shù)對(duì)人不同腫瘤細(xì)胞中的硫酸基(磺基)轉(zhuǎn)移酶、半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶三個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族進(jìn)行表達(dá)譜分析。結(jié)果 成功地建立了以膜為基礎(chǔ)的斑點(diǎn)雜交技術(shù)，并檢測(cè)了不同腫瘤細(xì)胞株的pp-GalNAcT2的差異表達(dá)，再建立N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶基因家族芯片，發(fā)現(xiàn)NBT和BCIP顯色法與化學(xué)發(fā)光法相比，其靈敏度不足以檢出所有基因的表達(dá)差異，需采用靈敏度更高的顯影或檢測(cè)系統(tǒng)；但也進(jìn)一步證實(shí)了pp-GalNAcT2和T4在不同腫瘤細(xì)胞株中均有相對(duì)高水平的表達(dá)，其表達(dá)與否可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。同時(shí)采用TOPO-TA克隆建立了糖基轉(zhuǎn)移酶三個(gè)基因家族：硫酸基(磺基)轉(zhuǎn)移酶、半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶的cDNA文庫(kù)，并以此制成低密度表達(dá)譜基因芯片。通過(guò)此芯片采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)到不同人腫瘤細(xì)胞中相應(yīng)的表達(dá)譜，結(jié)果表明：(一) 在不同腫瘤細(xì)胞中，除了SHG44和PC12等神經(jīng)細(xì)胞未檢出硫酸基(磺基)轉(zhuǎn)移酶IGlcNAc6ST表達(dá)外，IGlcNAc6ST在其余幾種肺癌、胃癌和白血病腫瘤細(xì)胞株中均有高水平的表達(dá)，其表達(dá)與否可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。(二) 在不同腫瘤細(xì)胞中硫酸基(磺基)轉(zhuǎn)移酶、半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶三個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族的各個(gè)成員的表達(dá)水平不一。(三) 在同一腫瘤細(xì)胞中，硫酸基(磺基)轉(zhuǎn)移酶、半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶三個(gè)糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族內(nèi)各個(gè)成員的表達(dá)也有差異。結(jié)論 在不同腫瘤細(xì)胞中，糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族表達(dá)譜有差異，其表達(dá)差異可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著一定的相關(guān)性，特別是硫酸基(磺基)轉(zhuǎn)移酶IGlcNAc6ST高水平表達(dá)更值得關(guān)注，，但它們之間具體的聯(lián)系還需進(jìn)一步的研究。
【圖文】：

不同腫瘤細(xì)胞株三種糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族低密度表達(dá)譜基因芯片的初步研究第一部分表1:7901，NIH3T3，NB4，K562細(xì)胞斑點(diǎn)雜交掃描定量結(jié)果790119.9NIH3T3NB413.0K56229.015.410.45.工2.07.217.53.115.69.04.62.820.88.318.124.296.0O71.8119.8

圖9:7901和K562細(xì)胞芯片掃描所得pp一GalNAc咒和T4相對(duì)表達(dá)水平直方圖試劑盒檢測(cè)了胃癌細(xì)胞SGC7901的表達(dá)譜，化學(xué)發(fā)光法靈敏度雖高，可需要在膠上顯影，其最終結(jié)果受顯影技術(shù)、顯影時(shí)間等因素影響，操作相對(duì)煩瑣，且不直觀而NBT和BCIP顯色法直接在膜上顯影，操作簡(jiǎn)便，價(jià)格便宜，也具有較高的靈度，因此我們希望能用NBT和BCIP顯色系統(tǒng)來(lái)代替化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到兩種表達(dá)水平最高的基因pp一GalNAcTZ和T4的表達(dá)譜，SGC7901細(xì)胞兩者達(dá)結(jié)果與去年相一致，說(shuō)明NBT和BCIP顯色系統(tǒng)由于靈敏度的限制可能不能完
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2635924