發(fā)布時間：2017-03-23 06:21

  本文關(guān)鍵詞：炎癥小體在衰老腎臟中的表達(dá)變化研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:腎臟衰老的機(jī)制目前尚不很清楚。近年研究顯示免疫炎癥反應(yīng)與腎臟衰老有關(guān)。在機(jī)體衰老過程中,適應(yīng)性免疫反應(yīng)(adaptive immunity response)顯著下降，表現(xiàn)為免疫衰老(immunosenescence);而固有免疫反應(yīng)(innate immunity response)明顯被激活,導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)一種低水平、慢性炎癥狀態(tài),即炎性衰老(inflamm-aging)。腎臟作為代謝活躍器官,極其容易衰老。炎癥小體(inflammasome)是機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的重要組分,由細(xì)胞內(nèi)模式識別受體(pattern recognition receptors, PRRs)、接頭蛋白ASC (apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD)及procaspase-1蛋白組裝而成的高分子量多蛋白復(fù)合物。多種不同外源性病原相關(guān)分子模式(pathgen-associated molecular pattrens, PAMPs)如細(xì)菌,和內(nèi)源性危險信號相關(guān)分子模式(danger-associated molecular patterns, DAMPs)如活性氧(reactive oxygen species, ROS)可通過與模式識別受體結(jié)合誘導(dǎo)炎癥小體的組裝與激活,導(dǎo)致模式識別受體蛋白(如NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2)發(fā)生自身寡聚化,招募接頭蛋白(ASC)及效應(yīng)蛋白(caspase-1)前體,共同裝配成多蛋白復(fù)合體,激活caspase-1 (IL-1β轉(zhuǎn)化酶),進(jìn)而促進(jìn)促炎細(xì)胞因子IL-1β和IL-18前體(proIL-1β和proIL-18)的剪切成熟和分泌,引起系列炎癥反應(yīng)。目前對于各種內(nèi)、外源性分子配體如何激活炎癥小體的機(jī)制還不清楚。NF-κB是細(xì)胞內(nèi)調(diào)控各種促炎因子表達(dá)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子。配體分子與TLR4及IL-1R結(jié)合后可激活下游NF-κB信號通路,調(diào)控炎癥小體組分NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2及proIL-1β和proIL-18的表達(dá)機(jī)制，此過程為炎癥小體的"priming"。目前僅有NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2四種模式識別受體可通過組裝成炎癥小體在固有免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮作用。近年研究顯示炎癥小體與多種疾病如老年癡呆、糖尿病、動脈粥樣硬化、痛風(fēng)等的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但是,目前對炎癥小體在腎臟器官衰老中的作用及機(jī)制尚不清楚。本研究中我們首次系統(tǒng)性地觀察了調(diào)控炎癥小體表達(dá)的上游‘'priming"信號通路分子,炎癥小體成分及其下游的促炎細(xì)胞細(xì)胞因子在腎臟衰老中的表達(dá)變化。這些研究對于理解腎臟衰老發(fā)生和發(fā)展機(jī)制以及探索新的延緩衰老相關(guān)腎臟疾病的治療方案具有重要的意義。方法：1、將雄性Fischer344大鼠隨機(jī)分為3月齡(青年組)和24月齡(老年組)兩組,每組各10只。留取24小時尿液標(biāo)本,抽取血樣標(biāo)本后處死。尿液標(biāo)本檢測尿蛋白/肌酐比率,血液標(biāo)本檢測生化指標(biāo)及腎功能指標(biāo)(Scr、BUN)。留取部分腎臟組織液氮凍存,分別用于western blot及RT-qPCR檢測。另外取部分腎組織進(jìn)行OCT包埋和10%甲醛固定,分別用于免疫熒光染色、PAS染色及免疫組織化學(xué)染色。2、用PAS染色技術(shù)檢測青年組與老年組大鼠腎臟組織的病理變化。3、用western blot系統(tǒng)性地分析3月齡與24月齡腎臟組織中①調(diào)控炎癥小體表達(dá)的'priming"信號通路中的TLR4 (Toll樣受體4)、IL-1R及其下游NF-κB 信號通路分子Phospho-IRAK4, Phospho-IKKβ, Phospho-IKBα, Phospho-NF-κBp65 (Phospho-表示激活分子)的表達(dá)活化情況；②炎癥小體成分中NLRP1、NLRP3、 NLRC4、AIM2、procaspase-1、caspase-1及下游促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-18的前體及活化形式的表達(dá)水平。4、用實時定量PCR (RT-qPCR)檢測兩個年齡組腎組織中NLRP3、IL-1β、IL-18 mRNA的表達(dá)變化情況。5、用免疫組織化學(xué)染色及免疫熒光雙染色技術(shù)進(jìn)一步明確衰老腎組織中NLRP3、NLRC4、caspase-1的表達(dá)及在腎小球內(nèi)細(xì)胞定位情況。結(jié)果：1、PAS染色結(jié)果顯示,3月齡大鼠腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常,而24月齡大鼠腎組織中系膜細(xì)胞增生,系膜基質(zhì)增寬,硬化腎小球數(shù)目增多,彌漫性腎小管萎縮,腎間質(zhì)纖維化,炎性細(xì)胞浸潤。2、western blot結(jié)果顯示,與3月齡大鼠腎組織相比較,24月齡大鼠腎臟中調(diào)控炎癥小體表達(dá)的"priming"信號通路分子TLR4, IL-1R及下游NF-κB信號通路分子Phospho-IRAK4、Phospho-IKKβ、 Phospho-IKBα、Phospho-NF-κBp65表達(dá)均顯著升高；炎癥小體成分NLRP3、NLRC4、 pro-caspase-1、caspase-1及下游的促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-18及pro-IL-18勻明顯激活:NLRP1、AIM2、pro-IL-1β隨增齡變化不顯著。3、實時定量PCR結(jié)果顯示,在大鼠腎臟組織中,NLRP3、IL-1β、IL-18的表達(dá)隨增齡顯著升高。4、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,與3月齡大鼠腎組織相比較,24月齡大鼠腎組織中NLRP3的表達(dá)顯著升高,并且主要分布于腎小球內(nèi),腎小管內(nèi)基本無表達(dá)。免疫熒光雙染色結(jié)果顯示,衰老大鼠腎組織內(nèi)高表達(dá)的NLRC4及caspase-1主要分布在腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞,腎小管及腎間質(zhì)無表達(dá)。結(jié)論：在腎臟衰老過程中參與調(diào)控炎癥小體表達(dá)的上游"priming"信號通路分子被明顯活化,NLRP3炎癥小體與NLRC4炎癥小體被顯著激活并導(dǎo)致下游促炎細(xì)胞因子IL-1β與IL-18的表達(dá)上調(diào)。由此推斷炎癥小體信號通路活化在腎臟器官衰老的發(fā)生及發(fā)展機(jī)制中可能發(fā)揮至關(guān)重要的作用。本研究為今后制定延緩腎臟衰老及相關(guān)疾病的方案提供依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：腎臟 炎性衰老 炎癥小體 固有免疫系統(tǒng) 炎癥
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R339.38
【目錄】：

• 英文縮寫詞表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-15
• 材料和方法15-24
• 結(jié)果24-37
• 討論37-41
• 小結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-48
• 綜述48-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 發(fā)表文章情況60-61
• 致謝61

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳冷;王駿;趙蕾;吳亞菲;;核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域亞家族成員3炎癥小體的活化調(diào)節(jié)與牙周疾病的關(guān)系[J];國際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2015年06期

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  本文關(guān)鍵詞：炎癥小體在衰老腎臟中的表達(dá)變化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：263139