【摘要】： 小鼠胚胎早期卵黃囊和AGM區(qū)的造血發(fā)育顯示了造血發(fā)生同血管形成密切相關(guān)。造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞可能存在共同的前體細(xì)胞即成血-血管細(xì)胞(hemangiobalst)。ES細(xì)胞分化培養(yǎng)2.5-3.5天形成的擬胚體中可檢測到blast集落形成細(xì)胞(blast colony-forming cell，BL-CFC)，后者具有造血和內(nèi)皮雙向分化潛能，體外證明了成血-血管細(xì)胞的存在。EBs來源BL-CFC檢測成為研究成血-血管細(xì)胞的體外模型，為研究轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子等造血調(diào)控因素在成血-血管細(xì)胞發(fā)育中的作用提供了有效的途徑。本實(shí)驗(yàn)以建立的blast集落培養(yǎng)體系為基礎(chǔ)，研究BL-CFC的造血和內(nèi)皮分化潛能以及TGF-β_1對BL-CFC的產(chǎn)生和blast集落形成的影響。并對高增殖潛能集落形成細(xì)胞(high proliferative potential-colony forming cells，HPP-CFC)成血-血管活性進(jìn)行了初步鑒定。 首先，應(yīng)用CCE ES細(xì)胞系分化培養(yǎng)獲得blast集落，巢式RT-PCR方法檢測單個集落造血和內(nèi)皮相關(guān)基因的表達(dá)，免疫熒光染色證明blast集落來源的貼壁細(xì)胞表達(dá)CD31、VE-Cadherin／CD144和UEA-I，并可特異性吞噬LDL，證明其為內(nèi)皮細(xì)胞。造血集落培養(yǎng)檢測blast集落細(xì)胞的造血分化能力，證明BL-CFC不僅可產(chǎn)生包括原始造血和永久造血的多種定向造血祖細(xì)胞，而且可產(chǎn)生HPP-CFC，更加豐富了BL-CFC作為成血-血管細(xì)胞的功能性定義。 在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，blast集落培養(yǎng)的不同階段施加外源性TGF-β_1及其中和抗體，研究TGF-β_1對BL-CFC的產(chǎn)生及其分化能力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在EBs培養(yǎng)階段加入TGF-β_1中和抗體EBs中BL-CFC的數(shù)量明顯減少，而外源性TGF-β_1對BL-CFC的產(chǎn)生無顯著影響。在blast集落培養(yǎng)階段外源性TGF-β_1則明顯抑制blast集落的形成。提示TGF-β_1對成血-血管細(xì)胞發(fā)育的調(diào)控作用在成血-血管細(xì)胞產(chǎn)生前后有著不同的調(diào)控方式和機(jī)理。 BL-CFC在培養(yǎng)2.5-4天的EBs中短暫出現(xiàn)后消失，隨后HPP-CFC最早產(chǎn) 中文摘要 生于培養(yǎng)5天的EBs中，，BL一CFC消失后ES來源HPP一CFC，甚至胚胎造血細(xì) 胞來源的HPP一CFC是否會保持成血一血管細(xì)胞活性?回答此問題有助于了解成 血一血管細(xì)胞的發(fā)育、遷移和生長。我們?nèi)∨囵B(yǎng)7天的EBs以及10dPc小鼠胚 胎卵黃囊和AGM區(qū)來源的HPP一CFC進(jìn)行內(nèi)皮細(xì)胞分化誘導(dǎo)和鑒定，結(jié)果表 明上述來源的部分HPP一CFC產(chǎn)生多向造血細(xì)胞的同時(shí)具有內(nèi)皮分化能力，初 步證明HPP一CFC具有成血一血管細(xì)胞活性。
【圖文】：

Ab一EBAnti·TGF一plantibodyAb一BL一Anti一TGF一p!antibody各組BL一CFC計(jì)數(shù)結(jié)果如表1一2和圖1一7，T-EB組與正常組相比BL一CFC均數(shù)略高，t檢驗(yàn)P=0.7109，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。T-BL組與正常組相比BL一CFC明顯降低，t檢驗(yàn)P=0.0014，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。加入Anti一TGF一p;抗體后，Ab一EB組BL一CFC比正常組較低，t檢驗(yàn)P=0.0058

單個HPP一CFC集落中造血和內(nèi)皮相關(guān)基因mRNA水平的表達(dá)。EBS來源的HPP一cFc集落中2/4集落表達(dá)tie一2，1/4集落同時(shí)表達(dá)刀無~I和tie一2，所有集落均表達(dá)刀一maj’o;珠蛋白基因，2/4的集落同時(shí)表達(dá)內(nèi)皮和造血相關(guān)基因(圖2一3A)。10即。小鼠胚胎AGM區(qū)細(xì)胞來源的HPP一CFC集落中2/4集落表達(dá)刀無.1，所有的集落均表達(dá)AML一1和刀一major珠蛋白基因(圖2一3B)。1OdP。小鼠胚胎YS細(xì)胞來源的HPP一CFC集落中3/4集落表達(dá)刀個了，1/4集落同時(shí)表達(dá)刀肛I和tie一2，3/4集落同時(shí)表達(dá)內(nèi)皮和造血相關(guān)基因(圖2一3C)。C1234皿一I心岌二翔..白tie-ZI曰.......AML一1已曰七二‘日.曰介majo;吐士竺望攫巡瞥，黑繃如rl‘二翔口:獷:2二口f矛Jr戶r通了‘飛尸O廠，j月

本文編號：2628908