本文關(guān)鍵詞：NNK聯(lián)合LPS孵育對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的增殖及相關(guān)基因表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、4-(甲基亞硝氨基)-3-吡啶-1-丁酮(NNK)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7細(xì)胞增殖能力及C-myc、NF-κB、i NOS、Arginase、TNFα、IL-1α、IL-6基因表達(dá)的影響。方法體外培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7細(xì)胞,用Real time-PCR的方法檢測(cè)不同濃度的LPS、NNK刺激Raw264.7細(xì)胞C-myc m RNA的表達(dá)情況,選擇藥物最佳濃度。利用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對(duì)比所選濃度LPS、NNK及LPS聯(lián)合NNK不同孵育時(shí)間對(duì)Raw264.7細(xì)胞增殖能力的影響;Real time-PCR方法檢測(cè)C-myc及相關(guān)基因m RNA的表達(dá)情況;Western Blot技術(shù)檢測(cè)Raw264.7細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子C-myc蛋白的表達(dá)情況;免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)i NOS蛋白的表達(dá)情況;酶聯(lián)免疫技術(shù)定量炎性介質(zhì)TNF-a及IL-6的含量。結(jié)果(1)濃度為10 ng/ml、250ng/ml、1μg/ml和4μg/ml的LPS均可上調(diào)Raw264.7細(xì)胞的C-myc m RNA的相對(duì)表達(dá)量;1μg/ml LPS上調(diào)作用較其他組顯著性增強(qiáng)(P0.05)。濃度為5μM、10μM、25μM和100μM的NNK對(duì)Raw264.7細(xì)胞的C-myc m RNA表達(dá)影響有降低趨勢(shì),與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性。(2)選擇濃度為1μg/ml LPS+10μM NNK聯(lián)合孵育Raw264.7細(xì)胞,可見(jiàn)24h及36h NNK聯(lián)合LPS孵育組C-myc m RNA的相對(duì)表達(dá)量較LPS組顯著性降低(P24h0.0001,P36h0.05)。(3)LPS和LPS聯(lián)合NNK孵育均可降低Raw264.7細(xì)胞的增殖活性(P0.05),聯(lián)合孵育48h的抑制作用較單獨(dú)LPS孵育略強(qiáng)(P0.05)。(4)LPS孵育24h、36h、48h均可顯著刺激Raw264.7細(xì)胞NF-κB、Arginase、i NOS m RNA的表達(dá)。單獨(dú)NNK孵育24h、36h、48h可見(jiàn)NF-κB、Arginase、i NOS m RNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照相比無(wú)差異顯著性。LPS聯(lián)合NNK孵育24h、36h NF-κB、Arginase、i NOS m RNA相對(duì)表達(dá)量升高;其中孵育24h、36h的NF-κB、孵育36h的i NOS m RNA表達(dá)量顯著高于單獨(dú)LPS刺激組(P0.05);LPS聯(lián)合NNK孵育48h,Arginase m RNA表達(dá)量也升高,但低于單獨(dú)LPS刺激組(P0.01)。(5)LPS及LPS聯(lián)合NNK孵育Raw264.7細(xì)胞24h,IL-1a及IL-6 m RNA的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高,差異具有顯著性(P0.01)。LPS聯(lián)合NNK組IL-1αm RNA表達(dá)量顯著高于LPS組(P0.05)。(6)Western Blot結(jié)果顯示NNK、LPS、LPS聯(lián)合NNK組孵育24h和48h C-myc蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化。(7)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示LPS及LPS聯(lián)合NNK孵育48h,i NOS蛋白表達(dá)量明顯升高。(8)LPS和LPS聯(lián)合NNK聯(lián)合孵育Raw264.7細(xì)胞24h、48h,其IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)均較對(duì)照組顯著升高,LPS聯(lián)合NNK孵育48h IL-6蛋白表達(dá)量高于LPS組(P0.01),LPS聯(lián)合NNK孵育24h TNF-α蛋白表量達(dá)低于LPS組(P0.05)。結(jié)論NNK本身對(duì)巨噬細(xì)胞的增殖、向M1型轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)無(wú)明顯作用。LPS可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞C-myc、NF-κB、i NOS、Arginase、IL-1a、IL-6 m RNA的急劇升高,抑制該細(xì)胞的增殖、促其向M1型轉(zhuǎn)化。LPS聯(lián)合NNK聯(lián)合孵育強(qiáng)化了LPS激活NF-κB、IL-1α等基因作用、弱化了Arginase基因的表達(dá);進(jìn)一步促進(jìn)了M1型巨噬細(xì)胞的形成和激活,進(jìn)而刺激M1細(xì)胞產(chǎn)生和分泌IL-1α、i NOS等,增加NO的合成;造成正常細(xì)胞DNA的損傷增加,阻礙DNA修復(fù),誘導(dǎo)基因突變,刺激肺癌形成。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 4-(甲基亞硝氨基)-3-吡啶-1-丁酮 細(xì)胞增殖 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-8
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料8-13
• 1.1 主要試劑8-10
• 1.2 引物序列10-11
• 1.3 主要儀器一覽表11-13
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法13-17
• 2.1 巨噬細(xì)胞培養(yǎng)及根據(jù)C-myc mRNA表達(dá)選擇LPS、NNK實(shí)驗(yàn)劑量13
• 2.2 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育不同時(shí)間對(duì)巨噬細(xì)胞C-myc mRNA表達(dá)的影響13-15
• 2.3 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育對(duì)巨噬細(xì)胞增殖的影響15
• 2.4 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育對(duì)巨噬細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響15
• 2.5 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育對(duì)巨噬細(xì)胞IL-6、TNF-α 蛋白表達(dá)的影響15
• 2.6 LPS、NNK、LPS 聯(lián)合 NNK 孵育對(duì)巨噬細(xì)胞 IL-6、TNF-α 蛋白表達(dá)的影響15-16
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析16-17
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-28
• 3.1 不同濃度LPS、NNK孵育對(duì)Raw264.7 細(xì)胞C-myc mRNA表達(dá)的影響17
• 3.2 不同時(shí)間LPS、NNK孵育對(duì)Raw264.7 細(xì)胞C-myc mRNA表達(dá)的影響17-19
• 3.3 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育對(duì)RAW264.7 細(xì)胞增殖能力的影響 ..· 1419-21
• 3.4 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育對(duì)RAW264.7 細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響1921-25
• 3.5 LPS、NNK、LPS聯(lián)合NNK孵育對(duì)RAW264.7 細(xì)胞IL-6、TNF-α 蛋白表達(dá)的影響25-28
• 第四章 實(shí)驗(yàn)分析與討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 縮略詞表31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 綜述34-44
• 綜述參考文獻(xiàn)41-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 致謝45-46

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 吳琪;張靜;曹留霞;劉曉萍;陳琛;卞晶晶;;EGCG對(duì)LPS刺激人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡及CUGBP1蛋白表達(dá)的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年18期

  本文關(guān)鍵詞：NNK聯(lián)合LPS孵育對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞的增殖及相關(guān)基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：262674