【摘要】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是定植于人胃粘膜的重要致病菌，全球感染率高達50％以上，與慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍及胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，1994年世界衛(wèi)生組織(WHO)將幽門螺桿菌定為Ⅰ類致癌因子。藥物治療Hp存在較大的局限性(藥物毒副作用、費用昂貴、患者依從性差及耐藥菌株不斷增多等)，而疫苗接種可使人群獲得持久、有效的免疫力，是從人群中消除Hp的有效措施之一。動物實驗表明，重組尿素酶B亞單位(rUreB)輔以適當佐劑免疫動物后，不僅能夠產(chǎn)生有效的保護性免疫反應(yīng)，而且可清除體內(nèi)已感染的Hp。 幽門螺桿菌在粘膜部位感染機體，研究證實，Hp疫苗經(jīng)粘膜途徑接種能產(chǎn)生有效的保護性免疫應(yīng)答，發(fā)揮預(yù)防、治療Hp感染的作用。根據(jù)共同粘膜免疫系統(tǒng)(common mucosal immunity system，CMIS)理論，在一個粘膜部位接種可以在其它遠距離粘膜部位產(chǎn)生免疫反應(yīng)，胃、鼻腔、直腸均可作為粘膜接種的途徑。 鼻腔含有的蛋白水解酶較少，抗原不易被破壞，鼻腔免疫可以在多個粘膜部位產(chǎn)生sIgA反應(yīng)，誘導與胃腸相關(guān)淋巴組織(GALT)形式上相似的粘膜免疫反應(yīng)。直腸內(nèi)無蛋白水解酶、環(huán)境溫和，血管及淋巴豐富，直腸接種同樣可在胃腸粘膜誘導免疫應(yīng)答。然而，，鼻腔及直腸均為管腔通道，液體藥物停留時間較短，生物利用度低，用生物黏附劑卡泊波(carbopol)制備的凝膠，具有粘度高、生物粘附性好的特點，能延長藥物與粘膜的接觸時間。 目前，國內(nèi)外對幽門螺桿菌疫苗的研究僅局限在口服免疫，劑型以溶 液或微球為主，眾所周知，液體疫苗口服后易受到胃內(nèi)低pH及胃蛋白酶 的破壞;微球雖然是疫苗載體研究的熱點，但在制備過程中應(yīng)用的有機溶 劑及高溫操作會破壞疫苗的完整性，降低免疫效果.W/o/W型復(fù)乳以油膜 包裹藥物，可以保護藥物免受胃蛋白酶的破壞，并具有淋巴趨向性，而且 制備條件溫和，不影響藥物的穩(wěn)定性，適合作為蛋白類藥物的口服劑型。 本研究以rHP疫苗(含rUreB及佐劑LTB)為對象，研制了適合鼻腔、 直腸及口服免疫的劑型，考察了rHP疫苗經(jīng)鼻腔、直腸及口服接種后的免 疫應(yīng)答水平及保護效率，并探討了免疫保護機制。 疫苗凝膠的粘度系數(shù)為8050厘泊，常溫放置6個月凝膠沒有明顯變化， 抗原的性質(zhì)不受卡伯波及粘膜吸收促進劑的影響，動物實驗表明，與疫苗 液體相比，疫苗凝膠鼻腔及直腸接種產(chǎn)生的免疫應(yīng)答顯著增強(p0.01)。 疫苗復(fù)乳的包封率為98.3%，粒徑主要分布于2~10 pm之間，集中 于5一7pm，粘度為1432厘泊，體內(nèi)分布實驗顯示，6h胃中的抗原濃度 仍很高，腸系膜淋巴結(jié)中的放射量24h最高，與胃液作用0.5~6小時復(fù)乳 中的抗原不受影響，口服免疫小鼠后明顯提高了rHP疫苗的免疫應(yīng)答水平。 rHP疫苗經(jīng)鼻腔、直腸及口服免疫小鼠后，均在小鼠的血清、胃粘膜、 小腸粘膜沖洗液中產(chǎn)生了較強的特異性免疫應(yīng)答，并產(chǎn)生了明顯的抗HP 的免疫保護。ELISPOT抗體分泌細胞測定表明，三種途徑免疫均可在脾臟 及PP結(jié)產(chǎn)生抗體分泌細胞，與特異性抗體的測定結(jié)果相對應(yīng)，但不同途 徑存在差別。細胞因子的RT一PCR試驗證實，小鼠感染后胃組織主要有INF- Y表達，無IL一4表達，表現(xiàn)為Thl反應(yīng)，攻毒后未感染的免疫鼠胃組織中 則表達IL一4，表現(xiàn)為ThZ反應(yīng)。三種免疫途徑中鼻腔免疫劑量最小(10p 留只)，其次為直腸免疫(25 pg/只)，復(fù)乳50 pg/只。 結(jié)論: 1.制備了包裹效率高、穩(wěn)定性好的rHP復(fù)乳，粒徑大小適合抗原提呈 細胞的攝取，復(fù)乳能保護抗原免受胃消化酶破壞，劑量小，免疫效率高。 2.制備了生物粘附性強、性質(zhì)穩(wěn)定的r乃少凝膠劑，鼻腔及直腸免疫后 能明顯提高粘膜部位的免疫應(yīng)答。 3.鼻腔、直腸及口服免疫rHP疫苗均能誘導較強的粘膜免疫應(yīng)答，產(chǎn) 生明顯的抗枷的免疫保護，三種途徑均可作為rHP疫苗的免疫途徑。 誘導以 枷感染誘導以Thl反應(yīng)為主要特征的免疫應(yīng)答，而rHP疫苗主要 ThZ反應(yīng)為主要特征的保護性免疫應(yīng)答。
【圖文】：

抗原與脫氧膽酸鈉混合放置1個月后，未發(fā)生明顯的降解，表明抗原不受脫氧膽酸鈉的影響

JJJJJIIIgA一As�！�:gG一scSSSPleennn51曰。。901\口SV圖27不同途徑免疫小鼠后Fig27ASClevelsinsPleenandPeyedl月籠rent5.RT一PCR檢測小鼠胃和脾組枷攻毒前，PBS組及免疫組各組均表達IFN一Y。攻毒前，IL一免疫組中部分小鼠胃組織表達，脾臟IFN一Y及IL一4在攻擊前后各123
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

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本文編號：2598293