【摘要】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是定植于人胃粘膜的重要致病菌，全球感染率高達(dá)50％以上，與慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍及胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，1994年世界衛(wèi)生組織(WHO)將幽門螺桿菌定為Ⅰ類致癌因子。藥物治療Hp存在較大的局限性(藥物毒副作用、費(fèi)用昂貴、患者依從性差及耐藥菌株不斷增多等)，而疫苗接種可使人群獲得持久、有效的免疫力，是從人群中消除Hp的有效措施之一。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，重組尿素酶B亞單位(rUreB)輔以適當(dāng)佐劑免疫動(dòng)物后，不僅能夠產(chǎn)生有效的保護(hù)性免疫反應(yīng)，而且可清除體內(nèi)已感染的Hp。 幽門螺桿菌在粘膜部位感染機(jī)體，研究證實(shí)，Hp疫苗經(jīng)粘膜途徑接種能產(chǎn)生有效的保護(hù)性免疫應(yīng)答，發(fā)揮預(yù)防、治療Hp感染的作用。根據(jù)共同粘膜免疫系統(tǒng)(common mucosal immunity system，CMIS)理論，在一個(gè)粘膜部位接種可以在其它遠(yuǎn)距離粘膜部位產(chǎn)生免疫反應(yīng)，胃、鼻腔、直腸均可作為粘膜接種的途徑。 鼻腔含有的蛋白水解酶較少，抗原不易被破壞，鼻腔免疫可以在多個(gè)粘膜部位產(chǎn)生sIgA反應(yīng)，誘導(dǎo)與胃腸相關(guān)淋巴組織(GALT)形式上相似的粘膜免疫反應(yīng)。直腸內(nèi)無蛋白水解酶、環(huán)境溫和，血管及淋巴豐富，直腸接種同樣可在胃腸粘膜誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。然而，，鼻腔及直腸均為管腔通道，液體藥物停留時(shí)間較短，生物利用度低，用生物黏附劑卡泊波(carbopol)制備的凝膠，具有粘度高、生物粘附性好的特點(diǎn)，能延長(zhǎng)藥物與粘膜的接觸時(shí)間。 目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)幽門螺桿菌疫苗的研究?jī)H局限在口服免疫，劑型以溶 液或微球?yàn)橹�，眾所周知，液體疫苗口服后易受到胃內(nèi)低pH及胃蛋白酶 的破壞;微球雖然是疫苗載體研究的熱點(diǎn)，但在制備過程中應(yīng)用的有機(jī)溶 劑及高溫操作會(huì)破壞疫苗的完整性，降低免疫效果.W/o/W型復(fù)乳以油膜 包裹藥物，可以保護(hù)藥物免受胃蛋白酶的破壞，并具有淋巴趨向性，而且 制備條件溫和，不影響藥物的穩(wěn)定性，適合作為蛋白類藥物的口服劑型。 本研究以rHP疫苗(含rUreB及佐劑LTB)為對(duì)象，研制了適合鼻腔、 直腸及口服免疫的劑型，考察了rHP疫苗經(jīng)鼻腔、直腸及口服接種后的免 疫應(yīng)答水平及保護(hù)效率，并探討了免疫保護(hù)機(jī)制。 疫苗凝膠的粘度系數(shù)為8050厘泊，常溫放置6個(gè)月凝膠沒有明顯變化， 抗原的性質(zhì)不受卡伯波及粘膜吸收促進(jìn)劑的影響，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，與疫苗 液體相比，疫苗凝膠鼻腔及直腸接種產(chǎn)生的免疫應(yīng)答顯著增強(qiáng)(p0.01)。 疫苗復(fù)乳的包封率為98.3%，粒徑主要分布于2~10 pm之間，集中 于5一7pm，粘度為1432厘泊，體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)顯示，6h胃中的抗原濃度 仍很高，腸系膜淋巴結(jié)中的放射量24h最高，與胃液作用0.5~6小時(shí)復(fù)乳 中的抗原不受影響，口服免疫小鼠后明顯提高了rHP疫苗的免疫應(yīng)答水平。 rHP疫苗經(jīng)鼻腔、直腸及口服免疫小鼠后，均在小鼠的血清、胃粘膜、 小腸粘膜沖洗液中產(chǎn)生了較強(qiáng)的特異性免疫應(yīng)答，并產(chǎn)生了明顯的抗HP 的免疫保護(hù)。ELISPOT抗體分泌細(xì)胞測(cè)定表明，三種途徑免疫均可在脾臟 及PP結(jié)產(chǎn)生抗體分泌細(xì)胞，與特異性抗體的測(cè)定結(jié)果相對(duì)應(yīng)，但不同途 徑存在差別。細(xì)胞因子的RT一PCR試驗(yàn)證實(shí)，小鼠感染后胃組織主要有INF- Y表達(dá)，無IL一4表達(dá)，表現(xiàn)為Thl反應(yīng)，攻毒后未感染的免疫鼠胃組織中 則表達(dá)IL一4，表現(xiàn)為ThZ反應(yīng)。三種免疫途徑中鼻腔免疫劑量最小(10p 留只)，其次為直腸免疫(25 pg/只)，復(fù)乳50 pg/只。 結(jié)論: 1.制備了包裹效率高、穩(wěn)定性好的rHP復(fù)乳，粒徑大小適合抗原提呈 細(xì)胞的攝取，復(fù)乳能保護(hù)抗原免受胃消化酶破壞，劑量小，免疫效率高。 2.制備了生物粘附性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定的r乃少凝膠劑，鼻腔及直腸免疫后 能明顯提高粘膜部位的免疫應(yīng)答。 3.鼻腔、直腸及口服免疫rHP疫苗均能誘導(dǎo)較強(qiáng)的粘膜免疫應(yīng)答，產(chǎn) 生明顯的抗枷的免疫保護(hù)，三種途徑均可作為rHP疫苗的免疫途徑。 誘導(dǎo)以 枷感染誘導(dǎo)以Thl反應(yīng)為主要特征的免疫應(yīng)答，而rHP疫苗主要 ThZ反應(yīng)為主要特征的保護(hù)性免疫應(yīng)答。
【圖文】：

抗原與脫氧膽酸鈉混合放置1個(gè)月后，未發(fā)生明顯的降解，表明抗原不受脫氧膽酸鈉的影響

JJJJJIIIgA一As。’…:gG一scSSSPleennn51曰。。901\口SV圖27不同途徑免疫小鼠后Fig27ASClevelsinsPleenandPeyedl月籠rent5.RT一PCR檢測(cè)小鼠胃和脾組枷攻毒前，PBS組及免疫組各組均表達(dá)IFN一Y。攻毒前，IL一免疫組中部分小鼠胃組織表達(dá)，脾臟IFN一Y及IL一4在攻擊前后各123
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 曲俊兵;復(fù)方環(huán)麻滴鼻凝膠劑的制備及質(zhì)量控制[J];海峽藥學(xué);2001年03期

2 陸兵,謝英華,程度勝,朱厚礎(chǔ);重組人表皮生長(zhǎng)因子凝膠劑的研制[J];藥學(xué)實(shí)踐雜志;2001年03期

3 蔣曙光,屠錫德,劉國(guó)杰,李曉陽;聚合物微粒和納米粒用于疫苗的粘膜給藥[J];中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年04期

4 毛世瑞,楊宏圖,畢殿洲;提高藥物鼻粘膜吸收的途徑[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1998年11期

5 黃靜琳,陸錦芳,郭圣榮;生物粘附性聚丙烯酸類高分子在藥劑中的應(yīng)用[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志;2001年02期

6 徐輝,高杰英,舒翠莉,彭虹,石辛甫,邢麗,陳志華;雙價(jià)痢疾工程疫苗經(jīng)粘膜免疫動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年05期

7 徐輝,高杰英,石辛甫,邢麗,彭虹,舒翠莉,陳志華;免疫途徑及侵襲蛋白表達(dá)對(duì)痢疾疫苗免疫效果影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2001年05期

8 賴燕來，高杰英;用BA－ELISA斑點(diǎn)法檢測(cè)痢疾桿菌免疫小鼠GALT中的特異性抗體分泌細(xì)胞（ASC）[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1995年05期

本文編號(hào)：2598293