【摘要】：背景與目的: 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)可引起慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等上消化道疾病,并與胃癌、胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的發(fā)生有關(guān)�，F(xiàn)階段臨床治療Hp感染中存在患者依順性差、費用昂貴及日趨嚴(yán)重的細(xì)菌耐藥性等問題。大量實驗證明,Hp疫苗能有效地預(yù)防Hp感染。目前研究中的Hp疫苗基本都屬于預(yù)防性疫苗。然而,對Hp感染人群還需要進(jìn)一步研制安全有效的治療性Hp疫苗。動物實驗研究發(fā)現(xiàn),以Hp全菌抗原為基礎(chǔ)的疫苗對Hp感染有一定的治療效果。 因此,本研究對Hp滅活全菌治療性疫苗進(jìn)行初步研究,摸索滅活全菌的制備,篩選佐劑、免疫劑量、免疫途徑及免疫周期,觀察免疫治療效果及對Hp再次感染的抵抗力,初步探索Hp治療性疫苗免疫清除機(jī)制。 實驗設(shè)計: 1. 疫苗抗原制備:通過對接種量和產(chǎn)量定量,優(yōu)化液體培養(yǎng)Hp條件,福爾馬林滅活Hp全菌并檢定其質(zhì)量。 2. 佐劑選擇:分別以CT、LT、CpG為粘膜佐劑口服免疫,以弗氏佐劑、氫氧化鋁佐劑和CpG注射免疫Hp感染沙鼠模型,觀察治療效果。 3. 免疫劑量、免疫途徑、免疫周期的確定:用滅活Hp全菌加氫氧化鋁佐劑(以下簡稱“Hp治療性疫苗”)注射免疫Hp感染沙鼠模型,選擇最佳注射免疫途徑、免疫劑量、免疫周期。 4. Hp治療性疫苗免疫治療效果、免疫記憶性觀察:Hp治療性疫苗注射免疫Hp感染沙鼠模型,末次免疫后1月再次用同一菌株感染,觀察治療效果及抵抗再感染的作用。 5. 免疫清除機(jī)制探索:RT-PCR檢測疫苗免疫后沙鼠胃粘膜的INF-γ、IL-4及IL-12p40表達(dá)量的相對差異;Hp治療性疫苗用同樣方法免疫BALB/c小鼠,ELISA檢測不同時間Hp特異性血清IgG、IgA和唾液sIgA水平的變化。 研究結(jié)果: 1. 液體培養(yǎng)Hp接種菌量以106/ml為宜,培養(yǎng)27小時最佳;1:2000福爾馬林25℃下滅活1×109CFU/ml Hp全菌14小時,滅活完全,鏡下觀察其形態(tài)無變化,抗原性好, WP=9 4℃可保存12個月以上。 2. 滅活Hp全菌加氫氧化鋁佐劑注射對沙鼠胃內(nèi)Hp清除率較高,達(dá)93.3%。 3. 抗原以1×108CFU菌量為宜;0、1、2、3周免疫周期效果好。 4. Hp治療性疫苗對沙鼠胃內(nèi)Hp清除率達(dá)93.3%,對再次攻毒的保護(hù)率達(dá)90.0%。 5. 疫苗免疫后沙鼠胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40表達(dá)量均增加;BALB/c小鼠末次免疫后3周開始,特異性血清IgG、IgA和唾液sIgA水平均顯著升高。 結(jié)論: 本研究優(yōu)化了Hp培養(yǎng)及福爾馬林滅活條件,篩選了Hp治療性疫苗的佐劑和免疫方案。Hp治療性疫苗注射免疫Hp感染的沙鼠,能夠產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答并能有效清除Hp感染,而且對Hp再次攻毒有很好的免疫保護(hù)作用。沙鼠胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40表達(dá)量的改變,提示該疫苗的作用機(jī)制是誘導(dǎo)Th1/Th2平衡型免疫應(yīng)答,免疫后BALB/c小鼠特異性抗體顯示該疫苗誘導(dǎo)Hp特異性血清IgG、IgA和sIgA水平均升高。本試驗為研究Hp治療性疫苗提供了重要實驗依據(jù)。
【圖文】：

1：4000 福爾馬林滅活 16h 1：8000 福爾馬林滅活 16hHp inactivated with 1：4000 formalin by 16 hours Hp inactivated with 1：8000 formalin by 16 hours圖 3 不同福爾馬林濃度滅活 Hp16h 革蘭氏染色油鏡下觀察對比Fig 3 Observation results of Hp Inactivated with different formalin concentrations by 16 hours1 2 3 4 594KD67KD43KD30KD20.1KD14.4KDLane1: protein markerLane2: inactived Hp with 1：1000 formalinLane3: inactived Hp with 1：2000 formalinLane4: inactived Hp with 1：4000 formalinLane5: inactived Hp with 1：8000 formalin

WesternBlotting檢測不同福Fig4TheresultofWesternBlottingtestth
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R392

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5 ;[J];;年期

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7 ;[J];;年期

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9 ;[J];;年期

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5 楊忠東;王石磊;許文婷;李冬梅;;禽流感H5N1滅活疫苗與不同納米化佐劑聯(lián)合免疫研究[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

6 ;《新型脂質(zhì)體復(fù)合物佐劑(DLDC)》項目簡介[A];新型疫苗研發(fā)及基因工程疫苗應(yīng)用研討會論文集[C];2010年

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9 岳華;魏煒;岳占國;呂丕平;王連艷;馬光輝;蘇志國;;納微球粒徑大小對免疫學(xué)效應(yīng)的影響[A];生物顆粒與粉體制備、應(yīng)用技術(shù)研討會論文集[C];2010年

10 J.Aucouturier;V.Ganne;A.Laval;;用于豬病疫苗的佐劑[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2003年

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9 王振坤;轉(zhuǎn)氨酶正常的乙肝患者不宜使用抗病毒藥[N];健康報;2005年

10 記者　施曉慧;英研制出人用高效低劑量禽流感疫苗[N];人民日報;2006年

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3 劉野;新型納米材料佐劑和新型免疫原改造策略在HIV DNA疫苗研究中的應(yīng)用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 周向陽;新型熱休克蛋白HSP-DC激活樹突狀細(xì)胞及其佐劑效應(yīng)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

5 金昕曄;脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白疫苗預(yù)防高脂喂養(yǎng)小鼠胰島素抵抗及動脈粥樣硬化的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 吳庭才;豫西地區(qū)IBD流行毒株不同佐劑滅活苗的研制及應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

7 靳彥文;核酸疫苗的基因佐劑研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

8 鄭燕;優(yōu)化密碼沙眼衣原體主要外膜蛋白DNA疫苗免疫效果的研究[D];山東大學(xué);2007年

9 吳國華;豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子診斷與分子疫苗研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

10 宋毓民;SW-BSA人工合成抗原疫苗的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2009年

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1 劉開云;幽門螺桿菌治療性疫苗的動物實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 劉萍;日本血吸蟲rSjLAP和rSjFBPA重組蛋白抗原疫苗的保護(hù)性免疫效果評價[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

3 侯娟;Th17/Treg失衡在EAE小鼠模型免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

4 楊超;一種新的基因工程免疫增強(qiáng)因子（ICEM）及其功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

5 謝成彬;雙歧桿菌完整肽聚糖對重組乙肝表面抗原佐劑效應(yīng)的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

6 張術(shù);偽狂犬病核酸疫苗及其佐劑的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 張俊才;不同佐劑對卡介苗的特異性體液免疫與非特異性細(xì)胞免疫的免疫增強(qiáng)作用的研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

8 曾巖;雞γ-干擾素基因克隆、表達(dá)及對禽流感滅活苗的免疫增強(qiáng)作用[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 張水華;脂質(zhì)體流感亞單位疫苗的研究[D];上海交通大學(xué);2009年

10 張鋒鋼;豬肺炎支原體的分離及蜂膠佐劑滅活苗研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

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本文編號：2596278