【摘要】： 球形芽孢桿菌（Bacillus sphaericus，B.s）菌株是防治蚊蟲的重要病原菌，，由于其的殺蚊毒素基因是位于染色體上，質(zhì)粒的分子量小，所能提供的生物信息量少，因此對Bs質(zhì)粒還未見有關生物信息學方面的研究報道。本研究對通過對Bs Lp1-G株分離到的隱形質(zhì)粒的全序列測定及詳盡的生物信息學分析，首次報道了Bs小質(zhì)粒的分子遺傳學信息。 通過改進的QIAGEN質(zhì)粒試劑盒法，獲得了高純度質(zhì)粒DNA。根據(jù)酶解的結果，選擇了HindIII的一組片段，大小分別為6.4 kb、4.3 kb和0.75 kb，將其克隆到pUC18并進行序列測定。同時在各已測片段接頭處利用PCR技術通過Primer Walking法覆蓋測序gap，并判定各片段的拼接方式，從而獲得質(zhì)粒全序列。 測序結果顯示全長11,066 bp，平均CG％為37.92%。經(jīng)過軟件識別和綜合分析確定其編碼序列即ORF為23個�；蚓幋a密度為2.078個基因/kb，編碼鏈的平均長度為416 bp，編碼序列占全序列的百分比為86.6%，該質(zhì)粒的Genbank登記號為AY325804。通過與公共數(shù)據(jù)庫比對，發(fā)現(xiàn)可以識別功能的ORF共有4個。其中最重要的是與質(zhì)粒復制所必需的rep基因，pLG的rep基因與已測序的蘇云金芽孢桿菌質(zhì)粒 pBMB9741和蘇云金芽孢桿菌質(zhì)粒pGI1的復制蛋白基因在氨基酸序列上分別有47.53%和40.89%同源性。并根據(jù)rep基因的同源性比較，判斷pLG的復制模式歸屬與RCR模式的GroupIII組，即pC194家族。ORF16與已測序的蘇云金芽孢桿菌質(zhì)粒 pGI3編碼的一個23.1 kDa蛋白在氨基酸序列上有30.89%的同源性，但功能未知。并且在這個ORF中存在的ATP/GTP結合結構域獨有的P-loop結構。另外ORF7和ORF8分別可能編碼富脯氨酸轉運蛋白和膜結合水解酶基因，同時這兩個OFR都存在信號肽序列。 為了研究其復制單元的特性，我們將pLG質(zhì)粒用酶解為大小不同的片段，分別克隆到載體pAW001上，轉化Bt 4Q7觀察其復制能力。初步結果表明重組克隆子pAW2的插入片段含有 pLG的復制單元，轉化率約為3x10~3個/(g DNA。
【學位授予單位】：中國科學院研究生院(武漢病毒研究所)
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：2595172