發(fā)布時(shí)間：2020-03-22 13:28

【摘要】： 研究目的：闡明Dokl-PTB結(jié)構(gòu)域與RTK相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)和特異性，并揭示其生物學(xué)功能確切的分子機(jī)制。酪氨酸蛋白激酶下游分子(Downstream of tyrosine Kinase，Dok)是一類最近發(fā)現(xiàn)的新型酪氨酸殘基磷酸化蛋白質(zhì)，是廣泛存在于多種細(xì)胞內(nèi)的信號分子，其作用可以看作是信號傳遞網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)節(jié)點(diǎn)。激活狀態(tài)的受體型酪氨酸蛋白激酶(Receptor Tyrosine Kinase，簡稱RTK)使Doks的特定位點(diǎn)的酪氦酸殘基磷酸化，并通過其后的蛋白質(zhì)磷酸化反應(yīng)傳遞信號，參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中細(xì)胞應(yīng)答特定刺激，，并介導(dǎo)產(chǎn)生存活、增殖、分化、黏附和遷移等生物學(xué)效應(yīng)。 鄭川人學(xué)Zde年研允T畢業(yè)論文 內(nèi)仆號分于k卜P＊8結(jié)構(gòu)域的R達(dá)、純化與功能研究 DOkS還在神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育中的遷移和運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)，在神經(jīng)元軸突導(dǎo) 向、成束以及細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)形成中，起著非常重要的作用。因而對 于DOkS的6）f究對在闡明腫瘤發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)退行性變和損傷修復(fù) 機(jī)制具有重要的理論和實(shí)踐意義。RTK介導(dǎo)生物效應(yīng)的特異性， 不儀耿決于配體分子和RT K腆外域的特異親和，并且還取訣于 RTKjg內(nèi)域作用的特異性底物分于l’］。原型成員 DOki最早是作為 一個(gè)酪氨酸殘基被磷酸化，并與a120ka。GAP結(jié)合的負(fù)性調(diào)節(jié)于而 被發(fā)現(xiàn)的，可以被RTK（EGFR、PDGFR、IR、Eph）、抗原受體嚇C l。RllB）和廠l”K（V－Src、V－Abl、1”。c和 p210bcr－abl融合癌蛋白） 所磷酸化l”‘－’＊來源于 DOkl／小鼠的骨髓細(xì)胞、T細(xì)胞、小鼠 肚胎纖維十細(xì)胞（jcl’。）比來源于野塵型小鼠的細(xì)胞在受到生長因 于刺激后表現(xiàn)出更高水平的增殖，而且在MEFS細(xì)胞中可以觀察到 VA爪被 l（。過量和過久的iM活【＼在B細(xì)胞中可以觀察到能夠抑制 抗原受體介導(dǎo) MAPK的激活和細(xì)胞增 9曠‘l。DOk山 48個(gè)氨基酸 伐叢組成，立體結(jié)構(gòu)尚未測定。序列分析和結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示：它含有 多個(gè)介導(dǎo)蛋白質(zhì)相互作用的區(qū)域，其中 M IPI 20為 PH結(jié)構(gòu)域， NI3 IQ260為 PTB結(jié)構(gòu)域，梭基端尾巴含有 10個(gè)潛在的酪氨酸 戲叢磷酸化位點(diǎn)和7個(gè)PXXP基序。研究表明，PH結(jié)構(gòu)域能夠和 細(xì)胞）JR上的酸性磷脂結(jié)合，將 DOk錨定于細(xì)胞內(nèi)表面，從而靠近 u·K卜‘；而PTB結(jié)構(gòu)域具有與SHZ結(jié)構(gòu)域相似的結(jié)合特性，也能 夠與磷酸化的酪氨酸殘基結(jié)合！’，’］；PXXP基序可以作為SH3結(jié)構(gòu) 域的停泊位點(diǎn)；己有文獻(xiàn)報(bào)道 DOk在應(yīng)答 EGF刺激時(shí)其酪氨酸 伐基被磷酸化［’‘·仙l，磷酸化的酪氨酸殘基可以和含有SHZ結(jié)構(gòu)域 第3頁 卜川｛人寸二W口丫礬＞H－牛咐，淪久 山mU分廣u人卜＊＊D綸川議的衣達(dá)、純化‘八M勸乃廣 象NCK、CSK、RasGAP ti信號分于結(jié)合。但目前對于Doki是怎 樣在牛長因于刺激后影響EGFR信號途徑和后續(xù)功能的，及兩稈之 0。川Wt）J的結(jié)合機(jī)制尚缺乏沈入認(rèn)以。卜！y結(jié)構(gòu)域仆為＊。；k。的分f 識(shí)別元件，在1人）k。介纖的生物學(xué)功能性中發(fā)揮著選擇性結(jié)合上游 兒V分廠的什川。雖然所訂的D；；k。成員均能與＊”K結(jié)合，但個(gè)同 的h；k。成員岡其川衛(wèi)糾構(gòu)域1’1叮F別，’－’虧不同的！訂K有不同的結(jié)合 特性。1）。M和1）。小2岡兒序列問圳叫1；較；氣、組織分布較一致、基囚 進(jìn)化關(guān)系較近，所以O(shè)許多川近功能。關(guān)于RTK信弓特異性己七許 多研究資料，少數(shù)的兒種受休llJ“以父用多種底物卜’“］。另外，也 何資料表明特定的仲泊分于能夠介導(dǎo)特異的生物應(yīng)答卜‘’‘“’‘’‘。其 叫。實(shí)驗(yàn)證明DOM能與m！V的卜1086和叭門48兩個(gè)位點(diǎn)特異性結(jié) 介，這此糾論人扣以究卅供了尸u淪提示和實(shí)驗(yàn)力’法依據(jù)。 方法：為深入認(rèn)識(shí)＊叭卜卜『rB納構(gòu)域在介導(dǎo)RT K信號轉(zhuǎn)皆中 的作川，闡明DOH－P”PB結(jié)構(gòu)域與RT K相互結(jié)合的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，本 研究采用重組＊NA技水構(gòu)勝了OS＊十‘IB結(jié)構(gòu)域的融合蛋白的衣 達(dá)質(zhì)粒，在大腸l。1廳j中實(shí)觀了側(cè)介蛋門的表達(dá)：利川交聯(lián)葡聚糖親 川店村一b化平糾蛋0’【；刊川GS丁1‘；川＊。一技術(shù)，證明＊。k的P＊B 結(jié)構(gòu)域，是否能夠特異性地與被激活的EGFR結(jié)合；利用小肽抑制 ’大驗(yàn)，證明激活11） EGFR 馴；個(gè)磷酸化的酪氨酸殘基參與了與 ＊＊hi．P＊B 糾構(gòu)域的結(jié)合；川”三維 ＊＊R解析斕定E＊FR 與 D＊k卜廠fB結(jié)構(gòu)域們廳伯川川v氮上酸殘基位點(diǎn)＠ 紀(jì)果二 1，通過＊C廠力沾，成j川也獨(dú)川了1）O卜1、DOM和DOb的廠m ill4 l｝［ q卜【I人？Z洲2十研究1畢業(yè)論義 內(nèi)認(rèn)V十廠凹。k卜阿B結(jié)構(gòu)域的友沾、純化一功能研究 結(jié)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R341

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4 李W

本文編號：2595105