【摘要】：①目的：通過定點(diǎn)誘變的方法，構(gòu)建基因變構(gòu)IL-2(~(88)N→R)的重組克隆；將26肽蜂毒素與基因變構(gòu)的人IL-2在基因水平連接，構(gòu)建嵌合體蛋白克隆并在原核系統(tǒng)中高效表達(dá)，并進(jìn)行初步純化和抗原性檢測。②方法：從一名健康男子的扁桃體細(xì)胞中分離T細(xì)胞經(jīng)PHA刺激活化后，提取細(xì)胞的RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄構(gòu)建cDNA文庫，經(jīng)套式PCR擴(kuò)增出編碼IL-2的基因，插入T-A載體后獲得編碼天然IL-2的克隆，核苷酸測序證實(shí)成功后，自行設(shè)計(jì)含有突變位點(diǎn)的引物，利用重組PCR技術(shù)，進(jìn)行定點(diǎn)誘變構(gòu)建基因變構(gòu)IL-2(~(88)N→R)的重組克隆，DNA測序確認(rèn)變構(gòu)成功。利用剪接式重疊延伸(spliced overlap extension，SOE)技術(shù)在26肽蜂毒素與基因變構(gòu)IL-2的基因之間導(dǎo)入四個(gè)易形成空間結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基組成的連接肽(Gly_4Ser)_3，構(gòu)建嵌合體蛋白的基因，克隆到原核表達(dá)載體pGEX4T-2中，，重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化宿主菌DH5α，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)目的融合蛋白，蛋白純化后經(jīng)SDS-PAGE電泳與Western blotting鑒定。③結(jié)果：獲得了基因變構(gòu)IL-2的編碼基因克隆及表達(dá)嵌合蛋白的重組菌，并得到純化的融合蛋白和Thrombin酶切后的嵌合蛋白；Western blotting鑒定表明純化的重組蛋白與人IL-2的單克隆抗體有良好的抗原特異性。④結(jié)論：在原核表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)了嵌合蛋白，純化后的蛋白有望是一種新型免疫調(diào)節(jié)劑，為進(jìn)一步在真核細(xì)胞中表達(dá)以及研究制備低毒、高效的新型細(xì)胞因子類免疫調(diào)節(jié)劑藥物奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王麗芳;單保恩;單鐵強(qiáng);;香加皮三萜類化合物對(duì)甲基芐基亞硝胺誘導(dǎo)的食管癌大鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能的影響[J];癌變·畸變·突變;2010年03期

2 方瑾,宋今丹;抗人大腸癌單鏈抗體基因的克隆與表達(dá)[J];癌癥;2002年07期

3 王興滿;湯仁樹;俞海洋;趙俊;王明麗;;兩種細(xì)胞株滴定重組豬α干擾素效價(jià)的比較研究[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2009年24期

4 侯偉,錢冬萌,閆志勇,趙百慧,付強(qiáng),王斌;基因變構(gòu)IL-2重組克隆的構(gòu)建[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年01期

5 郭建,宋達(dá)琳,王燕鳴;糖尿病并發(fā)感染大鼠模型建立及TNFα的變化[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期

6 孟林;劉明軍;王斌;錢冬萌;;~(88)Arg IL-2的克隆構(gòu)建及原核表達(dá)[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年04期

7 趙寶華,張莉;基因工程抗體的種類與應(yīng)用[J];保定師專學(xué)報(bào);2001年02期

8 陳黎龍;朱曉彤;江青艷;高萍;束剛;傅偉龍;;三肽囊素對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化、IL-2和IL-6分泌及其基因表達(dá)的影響[J];動(dòng)物學(xué)報(bào);2006年01期

9 路小龍,張鳳英,郭振泉,黃儀秀,朱圣庚;從噬菌體抗體庫中淘選人絨毛膜促性腺激素的單鏈抗體[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2002年02期

10 劉曉勇,張海燕,呂嬰,李衛(wèi)紅;堿性成纖維細(xì)胞生長因子對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖與ALP活性表達(dá)的影響[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2001年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前7條

1 趙丹萍;陶彬;陳立功;李艷琴;宋勤葉;李潭清;楊芳;李紅園;袁洪興;;PCV2感染對(duì)豬瘟弱毒疫苗接種豬免疫應(yīng)答的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

2 王英年;劉加洪;孫榮麗;張可佳;官明德;于華;李黎;張春玲;;P-選擇素、IL-1α、sFas、sFasL、AM檢測對(duì)結(jié)核性與惡性胸腔積液鑒別診斷價(jià)值暨與CEA比較系列研究[A];結(jié)核與肺部疾病論文集[C];2005年

3 陳曉;陳莉;陳亞瓊;楊振華;;T_(H1)型/T_(H2)型細(xì)胞因子對(duì)體外培養(yǎng)人早孕滋養(yǎng)層細(xì)胞HCG分泌及其PCNA和Bcl-2表達(dá)的影響[A];第四屆全國不孕癥暨保留生育功能微創(chuàng)手術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 雷楗勇;張蓮芬;楊健良;金堅(jiān);;人β干擾素-血清白蛋白融合蛋白在畢赤酵母中的分泌表達(dá)[A];2006第六屆中國藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

5 鄭志明;金社勝;肖希龍;候曉林;;抗諾氟沙星噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建與篩選[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

6 孟凡會(huì);田青武;曹永獻(xiàn);劉忠強(qiáng);孫波;趙洪國;;深低溫凍存對(duì)臍血單個(gè)核細(xì)胞免疫特性影響的研究[A];第五屆全國低溫生物醫(yī)學(xué)及器械學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議論文集[C];2006年

7 趙倉煥;朱小華;盛佑祥;;IL-2穴位注射對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠炎癥局部POMCmRNA和PENKmRNA表達(dá)的影響[A];中國針灸學(xué)會(huì)針灸文獻(xiàn)專業(yè)委員會(huì)2007學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜淑貞;玉米赤霉烯酮對(duì)斷奶仔豬的毒性初探及改性蒙脫石的脫毒效應(yīng)研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 陳志芬;人白細(xì)胞介素15與18協(xié)同作用腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞殺傷功能的研究[D];武漢大學(xué);2010年

3 孫敘敏;復(fù)方阿膠漿協(xié)同化療的減毒增效作用及其機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 陸曄斌;低氧誘導(dǎo)胰腺癌免疫逃逸機(jī)制及相關(guān)信號(hào)通路的初步研究[D];中南大學(xué);2010年

5 遲春萍;人銅鋅超氧化物歧化酶在畢赤酵母中高表達(dá)及其中試工藝研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 衛(wèi)娜;鵝白細(xì)胞介素2受體α鏈與白細(xì)胞介素18特性的初步研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 孫鳳霞;三聚氰胺單克隆抗體制備及其高靈敏快速檢測技術(shù)研究[D];江南大學(xué);2011年

8 魏萍;SAg-SEB和MDV誘導(dǎo)雛雞與荷瘤小鼠免疫學(xué)變化及細(xì)胞凋亡的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

9 李術(shù);奶山羊氟病毒理學(xué)的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

10 宋慧鋒;人胎兒皮膚無瘢痕愈合機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳玉紅;生物活性預(yù)混料對(duì)斷奶仔豬免疫功能影響的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 吳學(xué)寶;豬瘟病毒影響RANTES產(chǎn)生分子機(jī)制的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 張?jiān)i;趨化因子類病毒受體的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

4 梅雪;毒素清對(duì)肺炎痰熱證大鼠肺組織JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[D];河南中醫(yī)學(xué)院;2010年

5 蘭海濱;白附子混懸液對(duì)H_（22）荷瘤小鼠端粒酶活性及p16和bcl-2基因表達(dá)相關(guān)性研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2010年

6 卜獻(xiàn)策;中藥復(fù)方對(duì)脾氣虛變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜IL-2，β1-Defensin mRNA及血清IgE表達(dá)量的影響[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 李蕾;蛤蚧蛋白分離提取及其抗腫瘤分子機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

8 張斌;氟誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

9 高恒清;硝苦湯促進(jìn)兔背部人糞污染創(chuàng)面愈合及其預(yù)防創(chuàng)面過度瘢痕化的實(shí)驗(yàn)研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

10 孔斌;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒感染對(duì)肉雞主要免疫器官白細(xì)胞介素18產(chǎn)生的影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2593711