【摘要】：HBV感染是一個(gè)世界范圍的高感染率、高危害性的疾病。由HBV感染引起的慢性乙型肝炎是一種危害人民健康的嚴(yán)重疾病。目前，慢性乙型肝炎治療藥物主要是干擾素α和拉米夫定，但兩者都不能清除cccDNA，病毒仍可復(fù)制，停藥后病情會(huì)反復(fù)。對(duì)慢性HBV感染治療上的深入研究仍是當(dāng)務(wù)之急。 現(xiàn)有的基礎(chǔ)和臨床免疫學(xué)研究表明特異性細(xì)胞免疫是抗病毒免疫治療的關(guān)鍵。而樹突細(xì)胞作為目前已知的機(jī)體內(nèi)最強(qiáng)大的抗原遞呈細(xì)胞，機(jī)體免疫反應(yīng)的始動(dòng)者，在特異性細(xì)胞免疫中起著十分重要的作用，并與慢性乙肝的發(fā)病機(jī)理和治療都有十分緊密的聯(lián)系。以DC為基礎(chǔ)的免疫治療正成為慢性HBV感染和慢性乙型肝炎治療研究的一個(gè)新方向。 我們通過(guò)分離人外周血，用貼壁法獲取單核細(xì)胞，體外聯(lián)合應(yīng)用GM-CSF、IL-4、TNF-α、IFN-α，，培養(yǎng)誘導(dǎo)成熟DC。再選擇適合的HBV抗原濃度，予以兩次抗原沖擊，使其成為負(fù)載乙肝抗原(HBsAg或HBcAg)的DC。再將抗原負(fù)載DC和自體T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，用四色法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞內(nèi)因子，觀測(cè)DC對(duì)T淋巴細(xì)胞的活化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 一．人外周血單核細(xì)胞經(jīng)GM-CSF、IL-4、TNF-α、IFN-α聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)，第7天收獲成熟DC。其細(xì)胞形態(tài)典型，混雜細(xì)胞少。 南京醫(yī)科人學(xué)映l了學(xué)位論文 FCM檢測(cè)示DC表面分子分別為CD 1 a 55.53%、CD80 83.78%、DR 98.76%、CD86 99.08%、CD83 64.70%、CD4O 76.23%。A入ILR結(jié)果 顯示，培養(yǎng)DC具很強(qiáng)的T細(xì)胞增殖效應(yīng)。 二.抗原沖擊構(gòu)成抗原負(fù)載DC 用HBsAg或HBcAg抗原膚沖擊培養(yǎng)Dc，第7天收獲Dc后， 經(jīng)免疫組化檢測(cè)HBv抗原(HBSAg和HBcAg)，結(jié)果呈陽(yáng)性。 FCM 檢測(cè)DC表面分子無(wú)明顯變化，并且N幾R(shí)反應(yīng)提高。 三、經(jīng)絲裂霉素C處理的DC與自體維持淋巴細(xì)胞l:10混合培 養(yǎng)，5天后采用四色法測(cè)T淋巴細(xì)胞胞內(nèi)因子，IFN~v和IL一4，評(píng)估 抗原負(fù)載DC對(duì)T淋巴細(xì)胞的活化效應(yīng)。結(jié)果顯示，在體外漫乙肝病 人HBsAg負(fù)載DC和HBcAg負(fù)載Dc的誘導(dǎo)都以激活Thl和Tcl細(xì) 胞為主。HBsAb陽(yáng)性的健康人Dc負(fù)載HBsAg后還能產(chǎn)生明顯增強(qiáng) 的Thl和Tcl細(xì)胞因子。雖然慢性乙型肝炎病人的培養(yǎng)DC較正常人 表面分子表達(dá)明顯降低，抗原遞呈功能缺陷。但其自體HBcAg負(fù)載 DC所活化的T淋巴細(xì)胞效益以Thl和Tcl細(xì)胞亞群占優(yōu)勢(shì)，而且對(duì) 激發(fā)Thl和Tcl的功能較皿sAg負(fù)載DC顯著增強(qiáng)，為進(jìn)一步開展 自體HBcAg負(fù)載DC的抗乙肝病毒治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

培養(yǎng)第五天DC

共聚焦顯橄鏡下的成熟DC
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2592362