發(fā)布時(shí)間：2020-02-28 14:51

【摘要】： 細(xì)胞色素P4502D6(CYP2D6)是一種重要的藥物代謝酶,參與臨床近百種重要藥物的代謝,而且對(duì)藥物的代謝呈現(xiàn)出明顯的個(gè)體差異和種族差異,這是造成臨床用藥個(gè)體差異的重要原因。CYP2D6是最具有基因多態(tài)性的藥物代謝酶,目前已發(fā)現(xiàn)有七十多個(gè)變異位點(diǎn)。本研究擬制備基因芯片,測(cè)定中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性的分布頻率,并研究不同基因型的中國(guó)健康志愿者體內(nèi)曲馬多和美托洛爾的代謝特點(diǎn)及其對(duì)兩藥相互作用的影響。 1.基因芯片法測(cè)定中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性 根據(jù)CYP2D6基因序列的多態(tài)性分布特點(diǎn),針對(duì)在中國(guó)人群藥物代謝中具有潛在作用的突變位點(diǎn)C188T和G4268C(CYP2D6*2和CYP2D6*10),設(shè)計(jì)寡核苷酸探針,制備寡核苷酸芯片,測(cè)定312例中國(guó)健康志愿者CYP2D6的基因型,并使用直接測(cè)序法對(duì)分型結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,探討基因芯片技術(shù)應(yīng)用于CYP2D6基因分型的可行性。結(jié)果312例中國(guó)健康志愿者中CYP2D6*2和CYP2D6*10的變異頻率分別為CYP2D6*2W*10W 8.3%, *2H*10W 13.5%, *2M*10W 10.6%, *2M*10H 17.0%, *2M*10M 34.6%, *2H*10H 9.6%, *2H*10M 6.4%。對(duì)部分樣本采用直接測(cè)序的方法進(jìn)行進(jìn)一步確證,結(jié)果完全吻合。說明本研究建立的基因芯片適用于中國(guó)人群CYP2D6基因分型研究。 2.中國(guó)人群CYP2D6基因多態(tài)性對(duì)曲馬多藥代動(dòng)力學(xué)的影響 按照變異位點(diǎn),篩選40例健康志愿者,分為四組進(jìn)行試驗(yàn),每組10人。第一組:CYP2D6*2W*10W,第二組:CYP2D6*2H*10W和CYP2D6*2M*10W,
【圖文】：

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 匹配與錯(cuò)配探針信號(hào)強(qiáng)度比值的確定按照標(biāo)準(zhǔn)野生型與突變型質(zhì)粒模板的雜交結(jié)果，在優(yōu)化的雜交條件與嚴(yán)洗脫條件下，完全匹配的探針與單堿基錯(cuò)配的探針間，信號(hào)強(qiáng)度存在明顯的匹配與錯(cuò)配探針信號(hào)強(qiáng)度比值至少相差 4 倍。對(duì)基因芯片技術(shù)來說，雜合型基因的檢測(cè)是一個(gè)難點(diǎn)。在本研究中，人工構(gòu)建雜合型模板的雜交結(jié)果顯示于雜合型等位基因的探針對(duì)，其信號(hào)強(qiáng)度比值小于 2.5（信號(hào)比值為強(qiáng)信號(hào)號(hào)）。用基因組 DNA 所做的重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到近似結(jié)果。因而認(rèn)為信號(hào)比值大或小于 2.5 對(duì)分型結(jié)果的判斷有意義而當(dāng)信號(hào)值在 2.5-4 范圍內(nèi)應(yīng)重測(cè)。CY基因分型檢測(cè)信號(hào)如圖 1-1 所示。CYP2D6 基因分型芯片微陣列示意圖見圖

P2D6基因分型芯片微陣列示意圖NA 樣本的基因分型結(jié)果為中國(guó)漢族人，將檢測(cè)的兩個(gè) SNP 位點(diǎn)(C186*10 和 CYP2D6*2，每種結(jié)果均可分為三種基變型（mutant type, M）、雜合型（heterozygote, H有 7 種基因類型出現(xiàn)，，未發(fā)現(xiàn) CYP2D6*2W*1復(fù)實(shí)驗(yàn)得到相同的結(jié)果。312 例 DNA 樣本的基果
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R394;R96

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1 金e

本文編號(hào)：2583488