【摘要】： 神經(jīng)元限制性沉默因子(Neuronal Restrictive Silencer Factor，NRSF)作為一種轉(zhuǎn)錄負調(diào)控因子，參與調(diào)控神經(jīng)元特異性基因的表達。最近的研究表明NRSF還參與調(diào)控胰島細胞中神經(jīng)特異性基因及胰島相關(guān)基因的表達。本研究擬進一步尋找胰島細胞中可能存在的其它NRSF調(diào)控基因，進一步揭示NRSF在胰島發(fā)育過程中的作用。根據(jù)已有的研究及分析，我們通過篩選和序列比對發(fā)現(xiàn)人胰島素基因核心啟動子區(qū)及CART基因啟動子區(qū)分別有一段與NRSE相似的序列，都可能受NRSF調(diào)控。對于兩種基因我們分別進行了研究。首先，我們利用電泳遷移率變動分析實驗觀察人胰島素啟動子中NRSE樣基序與NRSF蛋白的結(jié)合情況；同時，我們構(gòu)建了含NRSF基因的慢病毒載體并包裝病毒，獲得了穩(wěn)定表達NRSF的INS-1細胞；構(gòu)建了含人胰島素啟動子—熒光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒載體及含2拷貝人胰島素啟動子NRSE樣基序—熒光素酶(NRSE-LUC)的報告載體，結(jié)果表明，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染分析中人胰島素啟動子的活性下降了38.1％，，瞬時轉(zhuǎn)染中啟動子轉(zhuǎn)錄下降了51.5％，這說明NRSF的過表達能明顯降低胰島素啟動子的活性；瞬時轉(zhuǎn)染實驗也顯示NRSF能明顯抑制NRSE-LUC的活性，此結(jié)構(gòu)介導的轉(zhuǎn)錄活性在NRSF表達組中的轉(zhuǎn)錄活性比對照組下降了32.6％。對于CART基因，電泳遷移率變動分析實驗證實其NRSE片段可以和NRSF結(jié)合；在INS-1中和PC12中，轉(zhuǎn)染NRSF分別使CART啟動子的轉(zhuǎn)錄活性下降64.6％和42.3％；在INS-1中和PC12中，NRSE基序介導的轉(zhuǎn)錄活性也被NRSF抑制，分別比為對照組下降了45.5％和43.2％，這說明CART基因通過此NRSE被NRSF調(diào)控；在Hela中干涉NRSF后，啟動子轉(zhuǎn)錄活性上升為2.41倍，NRSE片段介導轉(zhuǎn)錄活性上升為2.45倍；RT-PCR結(jié)果也表明NRSF可阻遏內(nèi)源性CART基因的轉(zhuǎn)錄；組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA的引入使轉(zhuǎn)錄活性大幅上升，進一步證實NRSF通過組蛋白去乙�；饔眠M行了轉(zhuǎn)錄抑制調(diào)控。結(jié)論：人胰島素基因啟動子中含有NRSE樣序列，該序列通過與NRSF蛋白結(jié)合從而抑制人胰島素啟動子的轉(zhuǎn)錄活性；CART基因啟動子區(qū)含有的NRSE樣序列也具同樣的功能。
【圖文】：

NRSF及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用示意圖

NRSE的共有序列，字號大小代表位點堿基保守性
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R363

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本文編號：2575834