神經(jīng)元限制性沉默因子對(duì)胰島相關(guān)基因調(diào)控作用的研究

發(fā)布時(shí)間：2020-02-03 00:58

【摘要】： 神經(jīng)元限制性沉默因子(Neuronal Restrictive Silencer Factor，NRSF)作為一種轉(zhuǎn)錄負(fù)調(diào)控因子，參與調(diào)控神經(jīng)元特異性基因的表達(dá)。最近的研究表明NRSF還參與調(diào)控胰島細(xì)胞中神經(jīng)特異性基因及胰島相關(guān)基因的表達(dá)。本研究擬進(jìn)一步尋找胰島細(xì)胞中可能存在的其它NRSF調(diào)控基因，進(jìn)一步揭示NRSF在胰島發(fā)育過程中的作用。根據(jù)已有的研究及分析，我們通過篩選和序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)人胰島素基因核心啟動(dòng)子區(qū)及CART基因啟動(dòng)子區(qū)分別有一段與NRSE相似的序列，都可能受NRSF調(diào)控。對(duì)于兩種基因我們分別進(jìn)行了研究。首先，我們利用電泳遷移率變動(dòng)分析實(shí)驗(yàn)觀察人胰島素啟動(dòng)子中NRSE樣基序與NRSF蛋白的結(jié)合情況；同時(shí)，我們構(gòu)建了含NRSF基因的慢病毒載體并包裝病毒，獲得了穩(wěn)定表達(dá)NRSF的INS-1細(xì)胞；構(gòu)建了含人胰島素啟動(dòng)子—熒光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒載體及含2拷貝人胰島素啟動(dòng)子NRSE樣基序—熒光素酶(NRSE-LUC)的報(bào)告載體，結(jié)果表明，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染分析中人胰島素啟動(dòng)子的活性下降了38.1％，，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染中啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄下降了51.5％，這說明NRSF的過表達(dá)能明顯降低胰島素啟動(dòng)子的活性；瞬時(shí)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)也顯示NRSF能明顯抑制NRSE-LUC的活性，此結(jié)構(gòu)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性在NRSF表達(dá)組中的轉(zhuǎn)錄活性比對(duì)照組下降了32.6％。對(duì)于CART基因，電泳遷移率變動(dòng)分析實(shí)驗(yàn)證實(shí)其NRSE片段可以和NRSF結(jié)合；在INS-1中和PC12中，轉(zhuǎn)染NRSF分別使CART啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性下降64.6％和42.3％；在INS-1中和PC12中，NRSE基序介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性也被NRSF抑制，分別比為對(duì)照組下降了45.5％和43.2％，這說明CART基因通過此NRSE被NRSF調(diào)控；在Hela中干涉NRSF后，啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性上升為2.41倍，NRSE片段介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活性上升為2.45倍；RT-PCR結(jié)果也表明NRSF可阻遏內(nèi)源性CART基因的轉(zhuǎn)錄；組蛋白去乙�；敢种苿㏕SA的引入使轉(zhuǎn)錄活性大幅上升，進(jìn)一步證實(shí)NRSF通過組蛋白去乙�；饔眠M(jìn)行了轉(zhuǎn)錄抑制調(diào)控。結(jié)論：人胰島素基因啟動(dòng)子中含有NRSE樣序列，該序列通過與NRSF蛋白結(jié)合從而抑制人胰島素啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性；CART基因啟動(dòng)子區(qū)含有的NRSE樣序列也具同樣的功能。
【圖文】：

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