【摘要】： 中華按蚊(Anopheles sinensis)和雷氏按蚊(An. lesteri)(原嗜人按蚊An. anthropophagus)是我國分布廣且常見的蚊種,是其分布區(qū)瘧疾的重要傳播媒介,實施有效的蚊媒防制手段是瘧疾控制的重要環(huán)節(jié),而蚊媒的生物學特性是制定防制策略的基礎。本研究擬構建中華按蚊和嗜人按蚊的微衛(wèi)星DNA庫,并篩選其中多態(tài)的微衛(wèi)星位點,其微衛(wèi)星DNA序列庫可為按蚊基因組學研究積累基礎資料;多態(tài)的微衛(wèi)星DNA位點將為中華按蚊和雷氏按蚊的基因定位、群體遺傳結構和生態(tài)學等領域的研究提供新的分子標志。 本研究應用基因組DNA的酶切片段與生物素標記的(AAT)17,(GA)25,(CCT)17,(AC)25,(CAG)17,(CA)18,(CAC)5,(TC)10,(GT)8和(TG)18等寡核苷酸探針雜交,結合親合素富集和超濾離心濃縮,首先將基因組DNA中含微衛(wèi)星DNA的片段富集,經(jīng)3次PCR擴增放大后,插入T載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌(E. coli),篩選含微衛(wèi)星DNA序列的陽性克隆,測定分析其序列,完成中華按蚊和雷氏按蚊微衛(wèi)星DNA庫的構建。在構建中華按蚊微衛(wèi)星DNA庫的基礎上,挑選合適的微衛(wèi)星位點,設計、合成引物,建立各微衛(wèi)星位點的PCR擴增體系。應用經(jīng)分子鑒別的中華按蚊現(xiàn)場樣本,聚丙烯酰氨凝膠電泳和基因掃描篩選具有多態(tài)性的微衛(wèi)星位點。 本研究獲得的結果如下: 1.構建的中華按蚊微衛(wèi)星DNA序列庫中包含282條序列,其中9條序列完全相同,故獨立的微衛(wèi)星DNA序列共273條。 2.本研究的中華按蚊微衛(wèi)星DNA序列庫中雙核苷酸重復最為常見,三核苷酸重復次之,多核苷酸重復少見,其中以(CA)n和(GT)n的微衛(wèi)星DNA序列含量最為豐富,重復次數(shù)最多的可達54次。其中完整的微衛(wèi)星DNA序列89個,占32.6%;非完整的序列82個,占30.1%;其余為復合序列,占37.3%。 3.筆者在構建的中華按蚊微衛(wèi)星DNA庫中,選取了22條適當?shù)男蛄?設計、合成引物,建立了PCR擴增體系,結果顯示其中15對引物有特異擴增條帶。 4.經(jīng)過對現(xiàn)場樣本的分子鑒別,選用確認的中華按蚊4個群體的40個樣本,PCR擴增各微衛(wèi)星位點,檢測結果顯示有10個微衛(wèi)星位點存在多態(tài)性,即:AS5,AS6,AS9,AS13,AS14,AS15,AS16,AS22,AS31和AS43。 5.本研究分離獲得61條雷氏按蚊的微衛(wèi)星DNA序列,其中獨立的序列共60條。
【圖文】：

第二軍醫(yī)大學碩士學位論文司，四色熒光標記的雙脫氧鏈終止法測序，常用 T 載體上通用引物（如：M13+）。2．12 序列分析方法測序結果以 Chromas 軟件進行核對，必要時采用 Clustal X 進行源性和差異性采用 Bioedit 和 Mega 軟件整理和分析。3 結果與討論3．1 酶切基因組 DNA、膠回收酶切片段M1 - 1 2 3 M2

圖 1－2 中華按蚊基因組 DNA 酶切片段連接產(chǎn)物 P泳道 1－4：連接產(chǎn)物的 PCR 產(chǎn)物；M：DN連接有 SAU 接頭的膠回收 DNA 片段作為 PCR 反應模物進行 PCR 擴增，，擴增產(chǎn)物片段應集中在 200 - 900 b與酶切基因組 DNA 后收集的的片段應大小一致，提示效的。3 PCR 富集微衛(wèi)星 DNA
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R384

【參考文獻】

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本文編號：2573166