【摘要】： DNA甲基化是DNA與甲基化酶相互作用的結(jié)果,是DNA分子重要的堿基修飾方式之一,它可以影響到核酸的結(jié)構(gòu)以及與蛋白質(zhì)的相互作用等,進(jìn)而影響到基因表達(dá)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展,因而是一個(gè)引起廣泛興趣的研究領(lǐng)域。本論文利用熒光分子探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)便、靈活的特點(diǎn),著眼于研究DNA與甲基化酶相互作用,開展的工作主要包括以下三個(gè)方面: 1.發(fā)夾型熒光分子探針用于DNA甲基化酶的活性分析及其在藥物篩選中的應(yīng)用 設(shè)計(jì)了莖部較長(zhǎng)的發(fā)夾型熒光分子探針,該探針比傳統(tǒng)的分子信標(biāo)熒光探針具有更高的穩(wěn)定性,甲基化酶和相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)被設(shè)計(jì)在發(fā)夾型探針的莖部,熒光基團(tuán)被連接在探針的5'端,其熒光被連在3'端的熄滅基團(tuán)所熄滅。限制性內(nèi)切酶可切割未發(fā)生甲基化修飾的探針,導(dǎo)致探針的發(fā)夾結(jié)構(gòu)遭到破壞,引起熒光基團(tuán)熒光信號(hào)的恢復(fù)。根據(jù)熒光信號(hào)的恢復(fù)程度可實(shí)現(xiàn)對(duì)甲基化酶活性的分析。在此基礎(chǔ)上,建立了一種簡(jiǎn)便、快速分析抗腫瘤藥物對(duì)DNA甲基化酶活性的影響的方法,為篩選針對(duì)基因甲基化異常引起的惡性腫瘤的治療藥物提供了一種新的思路和方法。 2.發(fā)夾型熒光分子探針用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)Taq I甲基化酶對(duì)DNA的甲基化 利用發(fā)夾型熒光分子探針設(shè)計(jì)的靈活性,根據(jù)Taq I甲基化酶和Dpn I限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列關(guān)系,在分子探針的莖部設(shè)計(jì)了兩個(gè)相鄰的Taq I甲基化酶的識(shí)別位點(diǎn),當(dāng)探針莖部?jī)蓚�(gè)識(shí)別位點(diǎn)被Taq I甲基化酶修飾時(shí)可形成限制性內(nèi)切酶Dpn I的切割位點(diǎn),發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖部被Dpn I切割而釋放熒光信號(hào),實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)Taq I甲基化酶對(duì)分子探針的甲基化過程,根據(jù)切割反應(yīng)的初始速率實(shí)現(xiàn)了Taq I甲基化酶活性的分析,該分析過程非常簡(jiǎn)便、快速。 3.酶識(shí)別序列外DNA甲基化對(duì)酶與DNA相互作用的影響 合成了酶識(shí)別序列外的胞嘧啶或腺嘌呤發(fā)生了甲基化修飾的分子探針,利用該探針定性地考察了酶識(shí)別序列外DNA甲基化對(duì)限制性內(nèi)切酶、甲基化酶與DNA相互作用的影響。該分析方法簡(jiǎn)便、快速,為研究酶識(shí)別序列外甲基化對(duì)酶與DNA相互作用的影響提供了一種新的簡(jiǎn)便方法。
【圖文】：

在高等真核生物中只發(fā)現(xiàn)了5-甲基胞嘧啶的甲基化形式。胞嘧啶甲基化是以S-腺苷-L-甲硫氨酸為甲基供體，將甲基轉(zhuǎn)移到胞嘧啶的第5位碳原子上，生成5－甲基胞嘧啶和S－腺苷酰高半胱氨酸（如圖1.1所示）。圖 1.1 胞嘧啶的甲基化[3]Figure 1.1 Cytosine methylation

與啟動(dòng)子的結(jié)合[9,10]。如圖1.2所示，該圖表示轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合未發(fā)生甲基化修飾的啟動(dòng)子，基因正常表達(dá)；當(dāng)啟動(dòng)子發(fā)生甲基化修飾時(shí)，由于甲基化結(jié)合蛋白與啟動(dòng)子特異性地結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子的結(jié)合，基因不表達(dá)。圖1.2 甲基化對(duì)含有CpG島啟動(dòng)子功能的影響[3]Figure 1.2 Effect of methylation on the function of a promoter containing a CpG island.1.1.3 DNA甲基化與腫瘤細(xì)胞癌變是基因表達(dá)失控的結(jié)果，而DNA的甲基化能引起基因表達(dá)的變化，
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 陳德風(fēng),孫梅,劉英苗,史國(guó)利,陳雅文;限制性核酸內(nèi)切酶PvuⅡ識(shí)別序列外甲基化抑制其酶切活性的分子機(jī)理研究[J];科學(xué)通報(bào);1997年22期

2 陳德風(fēng)，劉強(qiáng)，，趙西林，董元舒，李青;識(shí)別序列外DNA甲基化對(duì)限制性核酸內(nèi)切酶PvuⅡ酶切活性影響的研究[J];生物化學(xué)雜志;1996年01期

3 林一萍,陳比特,陳玉春;益腎健脾方劑對(duì)小鼠肝DNA甲基化酶活力的影響[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;1999年03期

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本文編號(hào)：2572751