【摘要】：目的： 培養(yǎng)擴增臍血(Umbilical cord blood，UCB)間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)；探索臍血間充質(zhì)干細胞分化為肝細胞，胰島細胞的條件；觀察體外誘導的胰島樣細胞能否在1型糖尿病小鼠模型體內(nèi)發(fā)揮降糖作用。 材料方法： 1．羥乙基淀粉沉淀法分離臍血中的有核細胞，以Mesencult~(TM)培養(yǎng)基(含10％的生長添加物)培養(yǎng)。 2．流式細胞儀檢測細胞表面抗原，測定細胞周期。 3．DMEM／F12+10％FBS+1μmol／L地塞米松+5U／ml胰島素，向脂肪細胞誘導，0.375％油紅O染色法，觀察誘導后細胞漿中的脂滴。 4．DMEM／F12+10％FBS+0.1μmol／L地塞米松+10mmol／L B-磷酸甘油+50μmol／L維生素C向成骨細胞誘導，堿性磷酸酶(鈣—鈷法)和鈣沉積(von Kossa法)判斷誘導的細胞是否具有成骨細胞的特征。 5．DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF(Hepatocyte growth factor，HGF)+10ng／ml EGF(Epidermal growth factor，EGF)+1×ITS(Insulin-transferrin-selenium，ITS)誘導2周，DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF+10ng／ml Oncostatin M+1×ITS繼續(xù)誘導2周，向肝細胞誘導分化。 6．向胰島細胞誘導 方案一：H-DMEM含5％FBS持續(xù)誘導；方案二：DMEM／F12(不含F(xiàn)BS)添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巰基乙醇誘導7d，含5％FBS的H-DMEM繼續(xù)誘導；方案三：DMEM／F12(不含F(xiàn)BS)添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巰基乙醇誘導7d，，H-DMEM培養(yǎng)基添加3ng／ml Activin A和10ng／ml HGF繼續(xù)誘導。
【圖文】：

圖1.流式細胞儀檢測臍血MSCs表面抗原的表達.其中cD13，cCD106陽性率分別為99.8%，915%，HLA一DR陽性率分別為14.3%，4.8%98%，33.3%:CD14，CD45，CD34，CD6%，1.8%，2.3%，2%

圖2.臍血MSCS培養(yǎng)過程中的形態(tài)變化(放大倍數(shù)10OX).A培養(yǎng)2周貼壁細胞以短梭形細胞為主，混有圓形、橢圓形細胞.B培養(yǎng)35d，原代較均一的梭形細胞，混有部分圓形細胞.C傳代72h的臍血MSCs，形態(tài)較均一，呈放射狀生長.D3代的臍血MSCs，形態(tài)均一，呈平行排列.妙洲孤蜘儼魂枷少嘟才獄娜娜淤噢一爪\緲辛杖那女
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R329

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本文編號：2564114