發(fā)布時間：2019-11-21 18:19

【摘要】：目的： 培養(yǎng)擴(kuò)增臍血(Umbilical cord blood，UCB)間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)；探索臍血間充質(zhì)干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞，胰島細(xì)胞的條件；觀察體外誘導(dǎo)的胰島樣細(xì)胞能否在1型糖尿病小鼠模型體內(nèi)發(fā)揮降糖作用。 材料方法： 1．羥乙基淀粉沉淀法分離臍血中的有核細(xì)胞，以Mesencult~(TM)培養(yǎng)基(含10％的生長添加物)培養(yǎng)。 2．流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原，測定細(xì)胞周期。 3．DMEM／F12+10％FBS+1μmol／L地塞米松+5U／ml胰島素，向脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)，0.375％油紅O染色法，觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞漿中的脂滴。 4．DMEM／F12+10％FBS+0.1μmol／L地塞米松+10mmol／L B-磷酸甘油+50μmol／L維生素C向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)，堿性磷酸酶(鈣—鈷法)和鈣沉積(von Kossa法)判斷誘導(dǎo)的細(xì)胞是否具有成骨細(xì)胞的特征。 5．DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF(Hepatocyte growth factor，HGF)+10ng／ml EGF(Epidermal growth factor，EGF)+1×ITS(Insulin-transferrin-selenium，ITS)誘導(dǎo)2周，DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF+10ng／ml Oncostatin M+1×ITS繼續(xù)誘導(dǎo)2周，向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化。 6．向胰島細(xì)胞誘導(dǎo) 方案一：H-DMEM含5％FBS持續(xù)誘導(dǎo)；方案二：DMEM／F12(不含F(xiàn)BS)添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巰基乙醇誘導(dǎo)7d，含5％FBS的H-DMEM繼續(xù)誘導(dǎo)；方案三：DMEM／F12(不含F(xiàn)BS)添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巰基乙醇誘導(dǎo)7d，，H-DMEM培養(yǎng)基添加3ng／ml Activin A和10ng／ml HGF繼續(xù)誘導(dǎo)。
【圖文】：

圖1.流式細(xì)胞儀檢測臍血MSCs表面抗原的表達(dá).其中cD13，cCD106陽性率分別為99.8%，915%，HLA一DR陽性率分別為14.3%，4.8%98%，33.3%:CD14，CD45，CD34，CD6%，1.8%，2.3%，2%

圖2.臍血MSCS培養(yǎng)過程中的形態(tài)變化(放大倍數(shù)10OX).A培養(yǎng)2周貼壁細(xì)胞以短梭形細(xì)胞為主，混有圓形、橢圓形細(xì)胞.B培養(yǎng)35d，原代較均一的梭形細(xì)胞，混有部分圓形細(xì)胞.C傳代72h的臍血MSCs，形態(tài)較均一，呈放射狀生長.D3代的臍血MSCs，形態(tài)均一，呈平行排列.妙洲孤蜘儼魂枷少嘟才獄娜娜淤噢一爪\緲辛杖那女
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R329

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本文編號：2564114