【摘要】：目的:研究鈦合金顆粒對體外培養(yǎng)條件下的成骨細胞增殖、分化能力的作用以及骨保護素(OPG)基因表達的影響,探討人工關節(jié)假體松動中磨損顆粒導致的骨溶解機制。 方法:1、取人胚胎顱骨骨膜,采有用酶消化法和組織培養(yǎng)法獲取成骨細胞體外培養(yǎng)并傳代,觀察細胞形態(tài),生物特點及成骨特性,并繪制生長曲線同時堿性磷酸酶染色鑒定成骨細胞以及比較凍存前3-5 代與凍存后成骨細胞的特點。2、電鏡下觀察鈦合金顆粒的形態(tài)并測量其粒徑,將不同濃度的鈦合金顆粒(1mg/ml,0.1mg/ml,0.01mg/ml)與成骨細胞共同培養(yǎng),分別于第2、4、6 天用MTT 法測量細胞增殖情況及4、7、10天用試劑盒檢測堿性磷酸酶活性。3、分別將不同濃度的鈦合金顆粒(1mg/ml,0.1mg/ml,0.01mg/ml)與成骨細胞基因培養(yǎng)3、6、9 天用RT-PCR 方法半定量測定骨保護素(OPG)基因mRNA 的表達。并用統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結果:1、培養(yǎng)的骨膜成骨細胞形態(tài)多為梭形和多角形與成纖維細胞相似,3-5 代成骨細胞生長特點穩(wěn)定,具有成骨能力,凍存后成骨細胞生存率,增殖能力明顯受到影響。2、①鈦合金顆粒直徑90%小于3μm,與體內(nèi)檢測到磨損顆粒大小基本一致。②10mg/ml 組鈦合金顆粒抑制了成骨細胞的增殖(P0.05),0.1mg/ml 和0.01mg/ml 組對成骨細胞的增殖影響不明顯。③不同濃度的鈦合金顆粒對成骨細胞堿性磷酸酶(ALP)的活性均有影響(P0.001),高濃度組對ALP 的影響較低濃度組更為顯著。3、不同濃度的鈦合金顆粒均抑制了成骨細胞骨保護素(OPG)基因表達,隨時間延長,0.01mg/ml 組對OPG 基因作用逐漸降低。 結論:1、自骨膜獲取人成骨細胞培養(yǎng)方法易形,可大量培養(yǎng)高純度的人成骨細胞供研究使用,凍存細胞不易作為研究對象。2、鈦合金顆粒對成骨細胞的增殖和成骨能力均有抑制作用,對成骨能力的影響更為顯著。3、鈦合金顆粒使成骨細胞OPG 基因表達下降。
【圖文】：

72℃、1min，30 個循環(huán)，72℃后延伸 10min。 5ulRT 一 PCR 產(chǎn)物加入 5μl 上樣緩沖液與 100bpmaker 在 1射儀觀察結果，用復日 FR－980 生物電泳圖像分析系統(tǒng)（測定相對積分光密度，并與內(nèi)參照β-actin 的光密度比較。結果） 經(jīng)嚴格去 Rnase 處理后，總 RNA 抽提物經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝解。） RT-PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1.5%瓊脂糖電泳顯示如圖 3-2，電泳第一 DNAmarker，由上至下分別為 2000bp，1000bp，750bp，50十三道為 RT-PCR 基因產(chǎn)物介于 300bp 與 400bp 之間，約為因片斷。

第l-2天時，，細胞貼附于瓶底，大部分仍為圓形
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

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本文編號：2560952