【摘要】： 目的:腦膠質瘤是最常見并且多發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤。傳統(tǒng)的手術、化療和放療等手段的療效均不是很理想[1]。膠質瘤細胞動力學研究表明,由于腫瘤呈浸潤性生長,有相當一部分腫瘤處于暫時靜息狀態(tài),即使切除了99%的腫瘤組織,8周后就可增殖恢復到原來的大小。隨著細胞生物學、分子生物學及生物工程技術的發(fā)展,給腦膠質瘤的治療帶來了新的希望。其中抗體介導的免疫診斷治療已成為腫瘤治療研究的熱點之一[2]。 所謂IgY抗體就是一種從卵黃中提取的具有特殊生物學功能的免疫球蛋白[3]。由于雞屬于非哺乳動物,與人類親緣關系較遠,故它對人類的病原體具有強免疫應答。膠質瘤IgY抗體能特異而選擇性的識別腦膠質瘤組織,因此它可以作為一種小型而高效的導向載體把毒素有目的地運輸?shù)侥[瘤細胞上,當載體識別腫瘤細胞后,立即與腫瘤細胞結合而釋放毒素,從而達到殺死腫瘤細胞而不影響其它正常細胞的目的[4]。此外IgY的制備成本低且產(chǎn)量高,亦無毒副作用,將成為大規(guī)�？贵w制備的一種有效手段。本研究旨在制備人腦膠質瘤細胞系U251 IgY抗體,并對其基本特性進行分析、鑒定,從而為腦腫瘤的診治提供新的思路。 方法:1.第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院神經(jīng)科學研究所惠贈的人腦膠質瘤細胞系U251,于37℃、5% CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)、傳代。 2.本研究所用的實驗動物為購于遼寧省遼陽益康生物制品廠的京白雞,正常飼養(yǎng)一周后,準備用于免疫。 3.收集長勢良好的U251細胞用生理鹽水配制成懸液,按照109個細胞/只雞免疫產(chǎn)蛋京白雞,初次免疫時需要加入等量的福氏完全佐劑,分別于雙翅膀皮下,左右背部皮下進行點注射。免疫一周后,逐日收集其所產(chǎn)的蛋,標記好時間,4℃保存?zhèn)溆谩?4.本研究以免疫前及免疫后第15、20、25、30、35、40、45天收集到的雞蛋為研究對象,去除蛋清,收集卵黃液經(jīng)過蒸餾水粗提,50%飽和硫酸銨鹽析,透析、以及聚乙二醇濃縮等步驟得到純化的IgY抗體[5],這里我們將其命名為AG-IgY(Against glioma IgY)。蛋白質定量后,再通過免疫組織化學、免疫細胞化學、SDS-PAGE、Western blot和ELISA等方法對所提抗體進行鑒定。 結果:經(jīng)抗原免疫的母雞,10天左右就可從其所產(chǎn)蛋的卵黃中檢測出特異性IgY抗體,抗體量在35天左右達到高峰,每個雞蛋可收獲100～200mg抗體。其熱穩(wěn)定性、耐酸性均較好,效價可以持續(xù)2～6個月。免疫細胞化學染色顯示,AG-IgY抗體與U251膠質瘤細胞呈強陽性反應,陽性部位主要位于細胞膜及細胞質。經(jīng)純化的AG-IgY通過還原性SDS-PAGE顯示兩條帶,其分子量約為70kD和20kD。ELISA結果顯示,IgY與肝癌、肺癌、乳腺癌、膠質瘤細胞U87等其他抗原之間無交叉反應。Western blot檢測所得結果完全相同。 結論:1.本實驗成功制備獲取了抗人腦膠質瘤的IgY抗體。 2.通過對其理化性質、SDS-PAGE、Western blot以及ELISA的研究結果表明, AG-IgY抗體是一種耐酸、耐熱、成本低、產(chǎn)量高并且制備簡便的新型抗體。其特異性較強,與無關抗原無交叉反應。 3.本研究將為人腦膠質瘤的診治提供新的研究手段。
【圖文】：

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AG-IgY抗體的免疫組化陽性結果，100×
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R739.41;R392

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6 劉U，

本文編號：2559033