【摘要】： 目的:腦膠質(zhì)瘤是最常見并且多發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤。傳統(tǒng)的手術(shù)、化療和放療等手段的療效均不是很理想[1]。膠質(zhì)瘤細(xì)胞動(dòng)力學(xué)研究表明,由于腫瘤呈浸潤性生長,有相當(dāng)一部分腫瘤處于暫時(shí)靜息狀態(tài),即使切除了99%的腫瘤組織,8周后就可增殖恢復(fù)到原來的大小。隨著細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)及生物工程技術(shù)的發(fā)展,給腦膠質(zhì)瘤的治療帶來了新的希望。其中抗體介導(dǎo)的免疫診斷治療已成為腫瘤治療研究的熱點(diǎn)之一[2]。 所謂IgY抗體就是一種從卵黃中提取的具有特殊生物學(xué)功能的免疫球蛋白[3]。由于雞屬于非哺乳動(dòng)物,與人類親緣關(guān)系較遠(yuǎn),故它對人類的病原體具有強(qiáng)免疫應(yīng)答。膠質(zhì)瘤IgY抗體能特異而選擇性的識(shí)別腦膠質(zhì)瘤組織,因此它可以作為一種小型而高效的導(dǎo)向載體把毒素有目的地運(yùn)輸?shù)侥[瘤細(xì)胞上,當(dāng)載體識(shí)別腫瘤細(xì)胞后,立即與腫瘤細(xì)胞結(jié)合而釋放毒素,從而達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞而不影響其它正常細(xì)胞的目的[4]。此外IgY的制備成本低且產(chǎn)量高,亦無毒副作用,將成為大規(guī)�？贵w制備的一種有效手段。本研究旨在制備人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251 IgY抗體,并對其基本特性進(jìn)行分析、鑒定,從而為腦腫瘤的診治提供新的思路。 方法:1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)科學(xué)研究所惠贈(zèng)的人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251,于37℃、5% CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)、傳代。 2.本研究所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為購于遼寧省遼陽益康生物制品廠的京白雞,正常飼養(yǎng)一周后,準(zhǔn)備用于免疫。 3.收集長勢良好的U251細(xì)胞用生理鹽水配制成懸液,按照109個(gè)細(xì)胞/只雞免疫產(chǎn)蛋京白雞,初次免疫時(shí)需要加入等量的福氏完全佐劑,分別于雙翅膀皮下,左右背部皮下進(jìn)行點(diǎn)注射。免疫一周后,逐日收集其所產(chǎn)的蛋,標(biāo)記好時(shí)間,4℃保存?zhèn)溆谩?4.本研究以免疫前及免疫后第15、20、25、30、35、40、45天收集到的雞蛋為研究對象,去除蛋清,收集卵黃液經(jīng)過蒸餾水粗提,50%飽和硫酸銨鹽析,透析、以及聚乙二醇濃縮等步驟得到純化的IgY抗體[5],這里我們將其命名為AG-IgY(Against glioma IgY)。蛋白質(zhì)定量后,再通過免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)、SDS-PAGE、Western blot和ELISA等方法對所提抗體進(jìn)行鑒定。 結(jié)果:經(jīng)抗原免疫的母雞,10天左右就可從其所產(chǎn)蛋的卵黃中檢測出特異性IgY抗體,抗體量在35天左右達(dá)到高峰,每個(gè)雞蛋可收獲100～200mg抗體。其熱穩(wěn)定性、耐酸性均較好,效價(jià)可以持續(xù)2～6個(gè)月。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,AG-IgY抗體與U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng),陽性部位主要位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)。經(jīng)純化的AG-IgY通過還原性SDS-PAGE顯示兩條帶,其分子量約為70kD和20kD。ELISA結(jié)果顯示,IgY與肝癌、肺癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87等其他抗原之間無交叉反應(yīng)。Western blot檢測所得結(jié)果完全相同。 結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)成功制備獲取了抗人腦膠質(zhì)瘤的IgY抗體。 2.通過對其理化性質(zhì)、SDS-PAGE、Western blot以及ELISA的研究結(jié)果表明, AG-IgY抗體是一種耐酸、耐熱、成本低、產(chǎn)量高并且制備簡便的新型抗體。其特異性較強(qiáng),與無關(guān)抗原無交叉反應(yīng)。 3.本研究將為人腦膠質(zhì)瘤的診治提供新的研究手段。
【圖文】：

轉(zhuǎn)印“三明治”示意圖

AG-IgY抗體的免疫組化陽性結(jié)果，100×
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R739.41;R392

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6 劉U，

本文編號(hào)：2559033