天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 醫(yī)學(xué)論文 > 病理論文 >

CD59基因突變與細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)性研究

發(fā)布時間:2019-11-06 06:48
【摘要】:目的 通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)構(gòu)建表達(dá)人突變CD59蛋白的重組真核表達(dá)載體,建立突變?nèi)薈D59真核表達(dá)系統(tǒng),獲得高效表達(dá)突變?nèi)薈D59蛋白的中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary,CHO)細(xì)胞株。經(jīng)凋亡相關(guān)基因--Fas、Bcl-2、NF-кB的表達(dá)情況,證實突變?nèi)薈D59在細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用,為腫瘤免疫逃逸機(jī)理的研究提供依據(jù)。 方法采用基因定點突變技術(shù)構(gòu)建CD59突變基因,設(shè)計互補突變引物和常規(guī)引物,以已構(gòu)建CD59cDNA重組質(zhì)粒為模板,重組PCR定點誘變擴(kuò)增突變基因,EcoRI酶切重組入真核表達(dá)質(zhì)粒pALTER-MAX。利用陽離子脂質(zhì)體(Lipofectamine-2000)導(dǎo)入法將含有突變?nèi)薈D59的重組pALTER-MAX質(zhì)粒與PcDNA3質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),用新霉素類似物G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆。通過熒光免疫組化(FIH)、酶免疫組化(EIH)、流式細(xì)胞儀法(FACS)和免疫印跡技術(shù)(Western blot)檢測篩選CD59突變基因高表達(dá)株。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色試驗檢測轉(zhuǎn)染前后CHO細(xì)胞凋亡相關(guān)基因--Fas、Bcl-2、NF-кB的表達(dá)情況。 結(jié)果 PCR定點誘變成功獲得目的CD59突變基因,序列測定及酶切鑒定均證實成功構(gòu)建了pALTER-MAX-突變CD59重組真核表達(dá)載體系統(tǒng)。運用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法將含有突變?nèi)薈D59的pALTER-MAX重組質(zhì)粒與PcDNA3共轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞,用含有400ug/mlG418的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)兩周,篩選出穩(wěn)定陽性表達(dá)克隆,繼續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增獲得穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。篩選出的陽性克隆細(xì)胞以熒光抗體技術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)檢測,表明在細(xì)胞膜表面有突變?nèi)薈D59分子的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步檢測并
【圖文】:

重組質(zhì)粒,酶切鑒定


插入的基因片段為49b5p,故重組pALI王R一MAX一突變CD59長約6kb。EocRlI酶切重組質(zhì)粒后于sooPb處見一條帶(圖1),,從而確定所構(gòu)建質(zhì)粒轉(zhuǎn)化擴(kuò)增成功。1234520X()PbInnn卜”75b0P500bP25b0P10b0P_495bP圖1重組質(zhì)粒pATLEReeMAX一突變CD59的酶切鑒定:DNADI田火er2:pATLE-RMAX一突變CD59重組質(zhì)粒3:EcofRI酶切pALTE-RMAx一突變CD59重組質(zhì)粒:4pALTE-RMAx一突變CD59重組質(zhì)粒:5Ec。很I酶切pALTER.MAx一突變CD59重組質(zhì)粒二、重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后經(jīng)以18篩選的陽性克隆

轉(zhuǎn)染,陽性克隆,重組質(zhì)粒,細(xì)胞


重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HCO細(xì)胞經(jīng)G418篩選兩周后形成的陽性克隆(lX)
【學(xué)位授予單位】:青島大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2006
【分類號】:R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白云,朱錫華;單克隆抗體2A7親和層析法純化紅細(xì)胞膜表面的CD59分子[J];免疫學(xué)雜志;1994年04期

2 王蔚;CD55與CD59及其在PNH患者血細(xì)胞膜上的表達(dá)[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;1997年01期

3 許彩民,楊洋,呂照江,潘華珍,張之南;體外轉(zhuǎn)運紅細(xì)胞囊泡的GPI錨定蛋白CD59保護(hù)陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥紅細(xì)胞<英文>[J];中國實驗血液學(xué)雜志;1999年02期

4 劉輝,顧軍,郭峰,張軍;銀屑病患者紅細(xì)胞及血小板天然免疫分子CR_1/CD_(59)表達(dá)的相關(guān)性變化[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2003年03期

5 孟建中,李丹丹,彭侃夫,張永壽,徐悅,肖鵬云;血液透析對轉(zhuǎn)化生長因子β1及補體調(diào)節(jié)蛋白CD59基因表達(dá)的影響[J];免疫學(xué)雜志;2003年06期

6 白云,朱錫華;抗CD59單克隆抗體的制備及鑒定[J];免疫學(xué)雜志;1994年04期

7 朱帆,曾憲春,蔣達(dá)和,李文鑫;膜表面補體調(diào)節(jié)因子[J];國外醫(yī)學(xué).分子生物學(xué)分冊;1998年04期

8 吳素華,馬虹,黃守堅,董吁鋼,吳楚昆,孫家鈞;CD59預(yù)防補體介導(dǎo)的離體豚鼠心臟損傷(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年02期

9 古亞娟,黃守堅,孫家鈞;人紅細(xì)胞膜CD59的分離及對依賴補體血小板損傷的保護(hù)[J];中國藥理學(xué)通報;1998年06期

10 汪澤厚,潘進(jìn)勇,唐明山,高明發(fā),潘俊,曾毅,朱錫華;人可溶性CD59的原核表達(dá)及其生物學(xué)活性的初步研究[J];上海免疫學(xué)雜志;2000年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李曉紅;朱杰寧;江雪燕;符永恒;單志新;林秋雄;鄧春玉;鄺素娟;余細(xì)勇;;建立骨髓干細(xì)胞基因定點突變細(xì)胞株的方法研究[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

2 高美華;李冰;李武修;王靜;王秋波;;突變的人CD59基因表達(dá)蛋白的功能研究[A];山東免疫學(xué)會、山東微生物學(xué)會醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)學(xué)會微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會2001年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2001年

3 錢寶華;花美仙;羅慶峰;吳英;牛芳;許文;郭峰;;正常人紅細(xì)胞天然免疫分子CD58、CD59定量實驗研究[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

4 高美華;王秋波;李冰;任書榮;張艷麗;;CD59基因突變與大鼠Ⅱ型糖尿病血管增殖癥的相關(guān)性研究[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

5 劉輝;顧軍;郭峰;錢寶華;花美仙;劉莉;薛春燕;;銀屑病患者紅細(xì)胞天然免疫分子CD35與CD59/ECKR相關(guān)性變化的初步研究[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

6 花美仙;錢寶華;郭峰;劉輝;顧軍;;銀屑病患者紅細(xì)胞CD35、CD59、與BCKR分子之間相關(guān)性實驗研究[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

7 劉輝;顧軍;郭峰;花美仙;劉莉;薛春燕;錢寶華;;銀屑病患者紅細(xì)胞天然免疫分子CD35與CD59/ECKR相關(guān)性變化的初步研究[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

8 劉輝;顧軍;郭峰;錢寶華;劉莉;花美仙;薛春;;銀屑病患者血小板天然免疫分子CD35、CD59與外周血淋巴細(xì)胞CD2的相關(guān)性[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

9 劉輝;顧軍;郭峰;錢寶華;花美仙;劉莉;薛春燕;;銀屑病患者血小板天然免疫分子CD35、CD59及外周血淋巴細(xì)胞CD2的檢測[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2003年

10 童秀珍;李娟;梁瑋;蘇暢;羅紹凱;彭愛華;周振海;鄭冬;;骨髓粒細(xì)胞、紅細(xì)胞CD55、CD59缺失在血液系統(tǒng)疾病中的意義[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 秦后彬 廖雅琴;白云 不知“深淺”的彝家女[N];解放軍報;2001年

2 欒雪梅;減輕溶血 提高生活質(zhì)量[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

3 何國慶 張灝;在酶制劑生產(chǎn)中的應(yīng)用(下)[N];中國食品報;2009年

4 主任醫(yī)師:劉清池;從脾論治陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿[N];黑龍江日報;2004年

5 吳維海;從脾論治陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿[N];健康報;2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 樊劍;補體調(diào)節(jié)蛋白CD59在非小細(xì)胞肺癌中的作用研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張志宏;異種器官移植用血管內(nèi)皮細(xì)胞組織特異性表達(dá)人DAF、CD59轉(zhuǎn)基因小鼠的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

3 韓根成;抗病毒及抗膜補體調(diào)節(jié)蛋白雙特異性抗體的制備及效應(yīng)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

4 雷呈祥;與自身免疫性溶血性貧血相關(guān)基因的克隆及在原核生物中的表達(dá)[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

5 朱新紅;CD59基因W40位點突變、真核表達(dá)與生物學(xué)活性研究[D];青島大學(xué);2008年

6 石學(xué)香;siRNA介導(dǎo)的RNAi對腫瘤細(xì)胞CD59沉默作用的研究[D];青島大學(xué);2009年

7 姚旭東;人DAF、CD59基因特異表達(dá)載體的構(gòu)建及其在豬血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

8 尹注增;新生豬Sertoli細(xì)胞在胰島移植中的免疫保護(hù)作用及其免疫豁免機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

9 張澤;異種移植用人補體調(diào)節(jié)蛋白在豬血管內(nèi)皮細(xì)胞特異表達(dá)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

10 喬慶;人類補體調(diào)節(jié)因子殼聚糖納米微囊混合物體外及體內(nèi)的初步實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張樹超;CD59基因突變與細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2006年

2 張麗;突變?nèi)薈D59基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)活性研究[D];青島大學(xué);2004年

3 任書榮;CD59基因突變與蛋白質(zhì)糖基化相關(guān)性的研究[D];青島大學(xué);2004年

4 何仗群;TMEM43基因定點突變克隆構(gòu)建及其功能初步分析[D];南華大學(xué);2011年

5 李良滿;C9、CD59在大鼠急性脊髓損傷組織中的表達(dá)及sCR1干預(yù)作用的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2002年

6 王銳利;多疣壁虎CD59參與斷尾再生過程中近遠(yuǎn)軸的位置記憶[D];南通大學(xué);2010年

7 張艷麗;HMCD59糖基化前后的抗補體活性研究[D];青島大學(xué);2004年

8 張亞軍;太極拳干預(yù)對非小細(xì)胞肺癌術(shù)后患者外周血細(xì)胞表面CD55和CD59表達(dá)的影響[D];上海體育學(xué)院;2010年

9 尹曉玲;乙型肝炎病毒X蛋白對小鼠足細(xì)胞補體調(diào)節(jié)蛋白CD59和Crry表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2010年

10 王璽;3周高住低訓(xùn)對優(yōu)秀賽艇運動員紅細(xì)胞CD55,CD59與系統(tǒng)免疫變化的影響[D];上海體育學(xué)院;2011年



本文編號:2556593

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/binglixuelunwen/2556593.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶6a72b***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
欧美乱妇日本乱码特黄大片| 免费啪视频免费欧美亚洲| 偷自拍亚洲欧美一区二页| 正在播放玩弄漂亮少妇高潮 | 欧美偷拍一区二区三区四区| 老外那个很粗大做起来很爽| 色无极东京热男人的天堂| 免费午夜福利不卡片在线 视频 | 精品国产亚洲区久久露脸| 国产激情国产精品久久源| 亚洲最新av在线观看| 色婷婷视频免费在线观看| 91国自产精品中文字幕亚洲| 婷婷激情四射在线观看视频| 国产综合欧美日韩在线精品| 好吊妞在线免费观看视频| 成年人免费看国产视频| 欧美国产日韩在线综合| 两性色午夜天堂免费视频| 日本不卡在线视频你懂的| 欧美日韩精品综合一区| 中文字幕无线码一区欧美| 欧洲一区二区三区自拍天堂| 婷婷色国产精品视频一区| 国产精品日韩欧美一区二区| 亚洲综合色婷婷七月丁香| 国产老熟女超碰一区二区三区| 欧美韩日在线观看一区| 国产在线不卡中文字幕| 在线免费视频你懂的观看| 国产高清一区二区白浆| 亚洲女同一区二区另类| 丰满的人妻一区二区三区| 好吊一区二区三区在线看| 中文字幕亚洲精品人妻| av在线免费观看在线免费观看| 偷自拍亚洲欧美一区二页| 欧美中文字幕日韩精品| 国产精品午夜一区二区三区| 国产黄色高清内射熟女视频| 色婷婷视频国产一区视频|