基因工程人組織激肽釋放酶原的細胞表達、分離純化及應用研究
發(fā)布時間:2019-10-28 09:59
【摘要】: 人組織激肽釋放酶是一種絲氨酸蛋白酶。它在人體內重要的生理作用說明它有可能成為治療腎臟病的有效藥物。此外,它在血液中的含量與缺血性腦中風的相關性研究顯示它可以作為該疾病體外診斷的重要指標。 本論文選用Sf-9及Hi-5兩種昆蟲細胞為載體,用基因工程的手段表達制備了人組織激肽釋放酶原。對兩種昆蟲細胞的無血清適應及懸浮適應條件進行了系統(tǒng)研究,將基因工程人組織激肽釋放酶原的表達量提高到25mg/L。對載有人組織激肽釋放酶cDNA的CHO細胞進行了無血清懸浮適應。 采用色譜技術對細胞表達產物進行了分離純化。探討了不同流動相組成、pH值、離子強度以及分離介質的影響。分離純化后的樣品經檢測為純品,分子量約為40961Da,回收率約為57%。 對檢測未知樣本中組織激肽釋放酶含量的ELISA方法進行了系統(tǒng)優(yōu)化。開發(fā)了缺血性腦中風早期診斷試劑盒。考查了試劑盒的各種指標,并將其用于660例健康人及21例腦中風患者血液中組織激肽釋放酶含量的檢測。此外,與大連醫(yī)科大學附屬二院合作,用分離純化后得到的人組織激肽釋放酶原對糖尿病腎病大鼠進行了實驗。結果顯示,組織激肽釋放酶對腎臟具有較好的保護作用。
【學位授予單位】:中國科學院研究生院(大連化學物理研究所)
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2005
【分類號】:R341
本文編號:2553056
【學位授予單位】:中國科學院研究生院(大連化學物理研究所)
【學位級別】:博士
【學位授予年份】:2005
【分類號】:R341
【參考文獻】
相關期刊論文 前1條
1 尹建梅,張善春,張麗華;彈性酶和胰激肽釋放酶對糖尿病腎病的療效觀察[J];新醫(yī)學;1998年05期
,本文編號:2553056
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/binglixuelunwen/2553056.html
最近更新
教材專著