發(fā)布時(shí)間：2019-10-22 23:49

【摘要】：目的:通過探討IL-2和基質(zhì)細(xì)胞源因了(SDF)-1α/CXCL12協(xié)同刺激下,Naive Th細(xì)胞Th1型、Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵分子的活化情況,判斷協(xié)同刺激誘導(dǎo)的Th細(xì)胞極化方向,以及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能的分子機(jī)制。 方法:使用流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR檢測IL-2和SDF-1α/CXCL12協(xié)同刺激的臍帶血(CB) CD4~+T細(xì)胞中胞內(nèi)Th1型/Th2型細(xì)胞因子的mRNA和蛋白兩個(gè)水平的表達(dá)情況;利用免疫復(fù)合物激酶分析法和免疫印記法,檢測協(xié)同誘導(dǎo)Th1極化過程中Syk激酶和ZAP-70激酶的磷酸化情況以及Cb1家族和NFAT家族活化的情況;使用Syk PNA技術(shù)阻斷Syk的表達(dá),探討Syk激酶在協(xié)同刺激后Th細(xì)胞極化過程中的重要意義;使用EMSA技術(shù)進(jìn)一步探討NFAT轉(zhuǎn)錄因子家族成員的活化情況,明確參與細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。 結(jié)果:流式檢測結(jié)果:用IL-2和SDF-1α/CXCL12刺激8天,CB CD4+T細(xì)胞(Naive Th)轉(zhuǎn)換成Th1細(xì)胞模式(84%IFN-γ陽性);RT-PCR檢測結(jié)果:新鮮分離的CBCD4~+ T細(xì)胞中的IFN-γ或者IL-4 mRNA大約7.3×10~2或者2.1×10~3拷貝;相應(yīng)的,用IL-2+SDF-1α刺激的細(xì)胞中的IFN-γ mRNA1.0×10~4拷貝,IL-4 mRNA大約有3.6×10~2拷貝;免疫復(fù)合物激酶分析法和免疫印記檢測結(jié)果:IL-2和SDF-1α/CXCL12協(xié)同刺激的8天內(nèi),Syk激酶和Cb1-b蛋白發(fā)生顯著而穩(wěn)定的磷酸
【圖文】：

/0sl拷貝，而用IL一2+sDF一la刺激的細(xì)胞中的FIN一YmNRA1.0/1擴(kuò)，IL一4mNRA大約有3.6\102拷貝(見圖2和3。其中△Rn:正�；瘓�(bào)告中基因信號(hào)與開始幾次PCR循環(huán)中得到的基線信號(hào)時(shí)之差;CT:域值周期，為我們第一次檢測到位于基線之上的報(bào)告基因的熒光信號(hào)時(shí)的PCR循環(huán)周期。)。圖2，實(shí)時(shí)定量R-TpcR檢測細(xì)胞因子FIN一丫m洲A的表達(dá)情況紅色曲線:標(biāo)準(zhǔn)DNA模板(p一actniZ，o\1了拷貝，c丁:17.5);黑色曲線:靜息cBcD+4T細(xì)胞C(T:23.5);藍(lán)色曲線:IL一2(longm/)l和sDF一la(100ngm/)l協(xié)同刺激細(xì)胞C(::18.9)。Figucr2.TherealtimequnatitativeR-TPCRofrcytokineIFN一YmR…NAdeteetion.29

實(shí)時(shí)定量RT‘PCR檢測細(xì)胞因子IL一4mRNJ八的表達(dá)情況色曲線:標(biāo)準(zhǔn)DNz氣模板(p一actni2.0/1擴(kuò)拷貝，，cT17.5);黑色曲線:靜息cBcDC(T:21.7);藍(lán)色曲線:.1I一2(10ngm/1)和SDF一la(100ng/m)l協(xié)同刺激細(xì)胞C(丁:24.)果，均同樣重復(fù)四次。u此3.TheeraltimequanlitatvieR-TPCRofrcytokineLI一4mR卜Adetecti。幾:stnadardDNAtemplaet(p一aetin2.0X204eopiescT:17口5):black::estingeBcD4+Tc7):blue:theeejlsstimu]atedwithIL一2andSDF一l儀/CXCL12(CT:24.7):resPeetivel多ThtsarerePresentativesofofursimilareXPerimentsperofmred.2IL一2和sDF一1。/cxcL12協(xié)同誘導(dǎo)syk激酶的磷酸化情況2.1免疫復(fù)合物激酶分析Syk激酶磷酸化情況，sDs一GE，s，:一32P，
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2551837