【摘要】： 目的：①印證4株馬爾尼菲青霉菌株中存在穩(wěn)定的形態(tài)學(xué)差異。②檢測4株馬爾尼菲青霉胞外總蛋白酶活性，研究其差異及影響因素。③檢測4株馬爾尼菲青霉胞外酶種類，研究其差異及影響因素。④研究馬爾尼菲青霉株間形態(tài)學(xué)特征和胞外酶活性特征之間的聯(lián)系，探討它們與馬爾尼菲青霉致病機(jī)制的關(guān)系。 方法：將4株已證實(shí)存在形態(tài)學(xué)差異的馬爾尼菲青霉MM株、MY株、P株、A株分別接種到沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)，分別在25℃和37℃培養(yǎng)，觀察株間菌落、鏡下的形態(tài)學(xué)差異；將4株菌分別同批接種到pH值為4.0的沙氏液體培養(yǎng)基、牛血紅蛋白-酵母碳基(Hb-YCB)液體培養(yǎng)基和牛血清白蛋白-酵母碳基(BSA-YCB)液體培養(yǎng)基。在37℃誘導(dǎo)培養(yǎng)9天，然后離心抽濾獲得濾過上清液，在pH7.4反應(yīng)體系中測定濾過上清液的總蛋白酶活性，比較株間胞外總蛋白酶活性的差異及不同培養(yǎng)基對蛋白酶活性的影響；分別測定4株菌的濾過上清液和生理鹽水菌懸液所含酶的種類，比較株間胞外酶種類的差異及菌懸液和上清液所含酶種類的差異。 結(jié)果：①M(fèi)M株與P株形態(tài)學(xué)特征一致，與文獻(xiàn)中對PM形態(tài)學(xué)特征的描述一致。MY株成熟菌落在25℃的菌落為扁平膜樣，鏡下菌絲較細(xì)，內(nèi)含大量顆粒，易見大量短菌絲，37℃鏡下菌體可形成完全酵母樣形態(tài)。A株25℃的成熟菌落表面為白色絨狀菌絲，產(chǎn)少量紅色色素，色素在培養(yǎng)基中滲透性低。②在本實(shí)驗(yàn)設(shè)計的技術(shù)路線中，在培養(yǎng)溫度是37℃，蛋白酶測定反應(yīng)體系為pH7.4時，在三種液體培養(yǎng)基，MY株的濾過上清液總蛋白酶活性均顯著高于其他3株菌(P＜0.01)。③通過對19種酶的定性分析，，4株馬爾尼菲青霉胞外酶種類構(gòu)成相似；4株菌均含有堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、磷酸水解酶和β-葡萄糖甙酶等10種酶。均不含有胰蛋白酶、糜蛋白酶和類脂酶等9種酶。各株菌懸液中酶種類多于或等于相應(yīng)培養(yǎng)上清液中的酶的種類。 結(jié)論：①從形態(tài)學(xué)上可鑒定MM株為P株在動物體內(nèi)傳代產(chǎn)生的同一性質(zhì)菌株，真菌學(xué)特征與文獻(xiàn)描述一致。MY株為P株在動物體內(nèi)傳代產(chǎn)生的突變菌株。②A株形態(tài)學(xué)特殊，可能為PM種內(nèi)突變菌株或亞種可通過測定G+C mol％進(jìn)一步確定。③MY株為高蛋白酶活性突變株，胞外蛋白酶活性顯著高于其他3株菌。④通過對19種酶的定性分析，4株菌所含胞外酶種類無明顯差異。⑤MY株在雙相性變化中偏酵母型的改變，蛋白酶活性高表達(dá)的特征與生長速度實(shí)驗(yàn)正相關(guān)，提示胞外蛋白酶在馬爾尼菲青霉的組織侵襲性和致病機(jī)制中可能起著重大作用。MY株可能為高致病力PM株。
【圖文】：

四川大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)碩十學(xué)位論文豢O一翻卜、t、.口/了、悅氣圖1飛_砂25℃SDA培養(yǎng)14d，MM株見長的直立分生抱子梗，帚狀枝 (x400倍)姿，、之全六-并.、、

本文編號：2551826