發(fā)布時(shí)間：2019-10-13 14:00

【摘要】：為了了解BMP-2和IGF-1對(duì)成骨細(xì)胞的促成骨作用在正常和碘缺乏的大鼠是否存在差異,我們復(fù)制了胚胎期和生后發(fā)育臨界期碘缺乏大鼠模型,把缺碘大鼠子代作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,從子代1-3天乳鼠的顱骨中分離出成骨細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)。利用來(lái)自正常和低碘大鼠顱骨的原代大鼠成骨細(xì)胞作為研究對(duì)象,分別加入終濃度為0,50,100,200 ng/ml的rhBMP-2和終濃度為0,1,10,100,1000 ng/ml的rhIGF-1,在給藥后24,48和72h分別收獲細(xì)胞提取總RNA,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)相對(duì)定量細(xì)胞中OC mRNA水平,動(dòng)態(tài)觀察rhBMP-2和rhIGF-1對(duì)OC基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):rhBMP-2和rhBMP-2作用時(shí)間的不同均導(dǎo)致正常和低碘組大鼠成骨細(xì)胞中OC mRNA水平發(fā)生改變(P0.05);rhBMP-2和rhIGF-1作用劑量的不同也會(huì)引起兩組OC mRNA水平發(fā)生不同程度的改變(P0.05),rhBMP-2在作用于兩組細(xì)胞48h時(shí)以及對(duì)正常組作用24h時(shí)有顯著性差異,rhIGF-1以10 ng/ml劑量時(shí)作用最明顯;低碘組對(duì)rhBMP-2和rhIGF-1作用的反應(yīng)性均較弱,其OC mRNA水平要低于正常組(P0.05),兩組間的差異在rhBMP-2作用24h和48h時(shí)表現(xiàn)明顯,而在作用72h時(shí)差異不明顯,rhIGF-1在作用24h時(shí)差別明顯。 同時(shí)在加入rhBMP-2和rhIGF-1后的24h和48h向細(xì)胞中加入MTT,用以檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖情況,并收獲細(xì)胞提取胞漿蛋白,采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定胞漿蛋白中ALP活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn):隨著加入rhBMP-2和rhIGF-1濃度的增加,正常和低碘組大鼠成骨細(xì)胞的數(shù)量也相應(yīng)增加(P0.05),rhBMP-2和rhIGF-1對(duì)成骨細(xì)胞起到促進(jìn)增殖的作用;rhBMP-2對(duì)正常和低碘組大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響之間的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而rhIGF-1對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響在正常和低碘組存在顯著性差異(P0.05),低碘組細(xì)胞增殖低于正常組,尤其在1000 ng/ml
【圖文】：

2酶學(xué)檢查:ALP細(xì)胞化學(xué)鑒定以ALP催化底物磷酸蔡酚AS一MX變成藍(lán)色沉淀為原理，結(jié)果可見成骨細(xì)胞內(nèi)酶活性部位呈現(xiàn)藍(lán)色沉淀，而胞核被固紅染為紅色(見圖3)。圖2大鼠成骨細(xì)胞活體(x200)圖3大鼠成骨細(xì)胞ALP染色(x200)三、MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30271154)

有1一2個(gè)核仁。每5只新生大鼠的顱骨所得的細(xì)胞大約可接種于1個(gè)50ml的培養(yǎng)瓶中。(3)接種的細(xì)胞約4一6天后可達(dá)到致密單層，，此時(shí)可以傳代(見圖2)。(4)原代培養(yǎng)的大鼠顱骨成骨細(xì)胞傳至第三代時(shí)，形態(tài)沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30271154)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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1 張鏡宇;郭若霖;趙學(xué)勤;左愛(ài)軍;郭善一;郭剛;;碘缺乏對(duì)大鼠顱骨中BMP-2、IGF-1基因表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

本文編號(hào)：2548703