發(fā)布時(shí)間：2019-09-29 02:40

【摘要】：目的:探討體外基因轉(zhuǎn)染及三維培養(yǎng)體系對(duì)誘導(dǎo)BMSCs向軟骨細(xì)胞定向分化的影響。方法:研究體外單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng)條件下BMSCs傳代、增殖的生物學(xué)特性;構(gòu)建TGF-β1基因重組腺病毒粘粒載體和重組腺病毒載體Ad.TGF-β1;研究Ad.TGF-β1基因轉(zhuǎn)染的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促成軟骨細(xì)胞分化的影響。結(jié)果:我們采用全骨髓漂洗法獲取兔長骨腔骨髓血并結(jié)合密度梯度離心法從骨髓血中分離出BMSCs加以純化,并成功進(jìn)行體外單層培養(yǎng)及三維培養(yǎng),構(gòu)建了較為穩(wěn)定的BMSCs體外三維培養(yǎng)體系;建立了安全、穩(wěn)定、有效的TGF-β1基因重組腺病毒載體Ad.TGF-β1構(gòu)建方法;轉(zhuǎn)染TGF-β1后BMSCs能持久地分泌顯著增加的特異性軟骨細(xì)胞外基質(zhì)成分Collagen Ⅱ、蛋白多糖等,且轉(zhuǎn)染后三維培養(yǎng)組優(yōu)于單層培養(yǎng)組。結(jié)論:體外基因轉(zhuǎn)染及三維培養(yǎng)體系具有明顯的促進(jìn)誘導(dǎo)BMSCs更好向軟骨細(xì)胞分化的作用。
【圖文】：

陣醫(yī)大學(xué)俘士學(xué)位論文第一部分骨外科專業(yè)胞逐漸壞死并隨換液次數(shù)的增多而被清除。原代培養(yǎng)4一5天貼壁細(xì)胞開始增殖并轉(zhuǎn)化為三角形、多角形和梭形(圖1一B1)。8一9天后，部分區(qū)域形成細(xì)胞集落，集落大小不均，集落中心細(xì)胞生長狀態(tài)良好，細(xì)胞呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞梭形外觀(圖1一IC)，有較多突起，胞核明顯，呈卵圓形，可見1一3個(gè)核仁，胞質(zhì)豐富、清晰。外圍細(xì)胞呈放射狀向外分布。生長期細(xì)胞分裂相多見，細(xì)胞突起互相聯(lián)接。10一15天細(xì)胞已達(dá)90%融合，細(xì)胞集落之間互相重疊

陣醫(yī)大學(xué)俘士學(xué)位論文第一部分骨外科專業(yè)胞逐漸壞死并隨換液次數(shù)的增多而被清除。原代培養(yǎng)4一5天貼壁細(xì)胞開始增殖并轉(zhuǎn)化為三角形、多角形和梭形(圖1一B1)。8一9天后，部分區(qū)域形成細(xì)胞集落，集落大小不均，集落中心細(xì)胞生長狀態(tài)良好，細(xì)胞呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞梭形外觀(圖1一IC)，有較多突起，胞核明顯，，呈卵圓形，可見1一3個(gè)核仁，胞質(zhì)豐富、清晰。外圍細(xì)胞呈放射狀向外分布。生長期細(xì)胞分裂相多見，細(xì)胞突起互相聯(lián)接。10一15天細(xì)胞已達(dá)90%融合，細(xì)胞集落之間互相重疊
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2543627