【摘要】：目的 尋找AFM觀察培養(yǎng)細(xì)胞獲得理想圖像的樣本制備方法;運(yùn)用AFM探尋正常細(xì)胞膜與腫瘤細(xì)胞膜表面結(jié)構(gòu)的異同:改變培養(yǎng)細(xì)胞的溫度和時(shí)間,觀察納米級(jí)水平下加熱引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的變化,進(jìn)而探討熱療對(duì)細(xì)胞的影響及意義。 材料與方法 采用人成纖維細(xì)胞(Fb cell)、人宮頸癌細(xì)胞(Hela cell)、人乳腺癌細(xì)胞(Mcf7 cell)、惡變的人成纖維細(xì)胞細(xì)胞(Ma-Fb),DMEM+10%(v/v)熱滅活的胎牛血清培養(yǎng)基(PH=7.2～7.3,濾過消毒),0.25%胰蛋白酶(1:250,PH=8),甲醛溶液,枸櫞酸鹽緩沖液,5%葡萄糖溶液。摸索AFM標(biāo)本制備方法:將培養(yǎng)好的細(xì)胞用2%甲醛溶液固定,置于較潔凈空間晾干,或直接用5%葡萄糖溶液或枸櫞酸鹽緩沖液沖洗3遍,置于較潔凈空間晾干。常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本的制備:將細(xì)胞接種于置有蓋玻片的培養(yǎng)皿中,當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿底部的80%時(shí),取出細(xì)胞爬片,用2%(v/v)福爾馬林溶液沖洗、固定后,用雙面膠貼于載玻片上,置于較潔凈空間晾干。加熱標(biāo)本的制備:如上接種并培養(yǎng)細(xì)胞,細(xì)胞長(zhǎng)好后,同時(shí)置于本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的不同溫度的隔水式恒溫箱中,加熱不同時(shí)間后取出,吹打細(xì)胞成細(xì)胞懸液,用2%福爾馬林溶液稀釋后,1000rpm,5min離心3遍,制成細(xì)胞涂片,放入較潔凈空間晾干。 利用AFM對(duì)晾干的標(biāo)本進(jìn)行掃描,采用Tapping模式,對(duì)每個(gè)樣本掃描6個(gè)細(xì)胞,每個(gè)細(xì)胞掃描4個(gè)區(qū)域,掃描范圍:80μm～500nm,掃描速率:0.5Hz～2Hz。 結(jié)果 2%甲醛溶液固定標(biāo)本和枸櫞酸鹽緩沖液沖洗標(biāo)本的細(xì)胞膜表面都很干凈,5%葡萄糖溶液沖洗后標(biāo)本圖像模糊成片,不能反應(yīng)出細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)。正常Fb細(xì)胞膜由較規(guī)則的突起與凹陷構(gòu)成,突起形狀較規(guī)則,大
【圖文】：

一:掃描范圍為500nm時(shí)，，2%甲醛溶液固定標(biāo)本

一:掃描范圍為500.田時(shí)，構(gòu)楷酸鹽緩沖液沖洗標(biāo)本
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R329;R361

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本文編號(hào)：2539492