【摘要】： 紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)是毛癬菌屬中最常見的親人性皮膚癬菌,臨床上約80%體股癬和72%手足癬及甲癬皆是由紅色毛癬菌引起。傳代易使表型變異等弊端給菌種鑒定帶來極大困難。因此,從基因水平鑒定菌種尤為重要。目前對核糖體DNA非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(NTS)的研究已成研究熱點(diǎn)。本研究將6株不同表型的紅色毛癬菌傳至20代,比較傳代前后表型的變化;并且用PCR法對6株紅色毛癬菌原代及第20代的核糖體保守區(qū)(5.8S和ITS2)和非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(NTS)內(nèi)的兩個重復(fù)亞單位(TRS1,TRS2)擴(kuò)增,序列測定,比較原代與第20代基因型及序列有無變化,從而探討傳代對紅色毛癬菌表型和基因型穩(wěn)定性的影響。 材料和方法:標(biāo)準(zhǔn)株為美國標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)標(biāo)本ATCC294(American type cult -ure collection)保存菌株,紅色毛癬菌臨床分離株5株。根據(jù)菌株的形態(tài),生理生化學(xué)鑒定為紅色毛癬菌。所有菌株采用沙氏瓊脂試管培養(yǎng)基培養(yǎng),間隔14天傳代1次,均傳至20代。表型的變異依據(jù)菌落的形態(tài)及色素。分別對6株原代及第20代的菌株,以真菌保守區(qū)核糖體基因和ITS2基因區(qū)內(nèi)引物(引物1序列為5’-GCATCGATGAAGAACGCAGC -3’,引物2序列為5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’),用PCR法擴(kuò)增,基因序列測定,核苷酸同源性檢索用BLAST軟件進(jìn)行分析。再以TrNTSF-2(5’-ACCGTATTAAGCTAGCGCTGC-3’), TrNTSR-4 (5’-TGCCACTTCGATTAG GAGGC-3’)和TrNTSR-1(5’-CTCAGTCGAACCGTGAGGC-3’), TrNTSC-1 (5’- CGAGACCACGTGATACATGCG-3’)兩對引物分別擴(kuò)增6株原代及相應(yīng)的第20代紅色毛癬菌的TRS1區(qū)和TRS2區(qū),基因序列測定,結(jié)果用clustalx軟件進(jìn)行比較分析。 結(jié)果:(1)6株紅色毛癬菌經(jīng)傳至20代,菌落形態(tài)、質(zhì)地及色素隨之變異,第一次傳代至第20代變異率由33.3%增至100.0%。形態(tài)逆轉(zhuǎn)率100.0%,色素逆轉(zhuǎn)率50.0%。(2)核糖體保守區(qū)(部分5.8s和ITS-2)基因序列測定,片段大小均約為320bp,與基因庫紅色毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC28188基因序列比,其同源性均達(dá)99%,再次證明,經(jīng)傳代后的菌仍為紅色毛癬菌。(3)在部分5.8S和ITS-2區(qū)、TRS-1區(qū)、TRS-2區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原代及第20代的PCR指紋圖無差異。(4)對
【圖文】：

部分菌種表型變化圖（標(biāo)準(zhǔn)株、13、15、18、22號菌）

－26株紅色毛癬菌從原代傳至20代的菌落形態(tài)變化
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R379

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本文編號：2538664