【摘要】： 目的比較對約氏瘧原蟲不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊基因組DNA遺傳多態(tài)性,探討媒介按蚊基因型與瘧原蟲基因型間的相互關(guān)系。 方法應(yīng)用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)技術(shù)對大劣按蚊和斯氏按蚊雌性成蚊基因組DNA進(jìn)行分析,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后,分析比較結(jié)果。從5條隨機(jī)引物中篩選出重復(fù)性好、譜帶清晰并呈多態(tài)性的引物,對遷移率相同的DNA條帶進(jìn)行回收、純化,與pMD-18T載體連接,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌XL1-blue,經(jīng)PCR鑒定后,目的基因測序,采用相關(guān)在線程序及軟件進(jìn)行序列比較分析;同時,對大劣按蚊和斯氏按蚊核糖體基因內(nèi)轉(zhuǎn)錄第二間隔區(qū)(rDNA ITS_2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,應(yīng)用限制性片斷長度多態(tài)性分析(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)技術(shù)分析PCR產(chǎn)物,并回收、純化擴(kuò)增的目的基因片段,經(jīng)TA克隆后測序鑒定,采用相關(guān)軟件進(jìn)行序列比較分析。在GenBank數(shù)據(jù)庫中查找其它傳瘧按蚊的rDNA ITS_2序列,用Clust W軟件進(jìn)行多序列比對,MEGA軟件構(gòu)建分子系統(tǒng)樹。 結(jié)果大劣按蚊和斯氏按蚊RAPD譜帶具有明顯的種間差異,其中引物P3、P4和P5對兩種按蚊成蚊基因組DNA進(jìn)行RAPD擴(kuò)增,均擴(kuò)增出清晰、穩(wěn)定性好、多態(tài)性豐富的譜帶。引物P4對兩種按蚊基因組DNA擴(kuò)增,有4對遷移率相同的DNA條帶。序列比較分析顯示此4對DNA條帶在序列長度和組成上均呈現(xiàn)多態(tài)性,堿基差異水平為60.0%～61.9%;序列的GC含量和簡單重復(fù)序列(SimpleSequence Repeat,SSR)具有明顯多態(tài)性。同時,大劣按蚊和斯氏按蚊ITS_2序列的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Xho I消化,產(chǎn)生不同的酶切圖譜,存在基因多態(tài)性。測序結(jié)果顯示大劣按蚊和斯氏按蚊ITS_2基因分別為715bp和466bp,兩者堿基差異水平為53.5%;兩種按蚊ITS_2序列的GC含量和簡單重復(fù)序列也存在明顯的多態(tài)性。分子系統(tǒng)樹顯示,大劣按蚊和斯氏按蚊形成單獨的支系。 結(jié)論大劣按蚊和斯氏按蚊基因組DNA序列間存在多態(tài)性,其基因的多態(tài)性可能與大劣按蚊和斯氏按蚊對約氏瘧原蟲產(chǎn)生不同的易感性相關(guān)。大劣按蚊和斯氏按蚊間存在不同的遺傳背景,為進(jìn)一步研究按蚊基因型與瘧原蟲基因型之間的相互作用奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

蚊的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，采用同一批號Ex一Taq酶，，通過反復(fù)實驗和篩選，擬選出隨機(jī)擴(kuò)增效果較好的引物。其中引物P3、P4和PS經(jīng)重復(fù)實驗擴(kuò)增條帶清晰、穩(wěn)定性好、多態(tài)性明顯(圖1)。

大劣按蚊擴(kuò)增出9條DNA條帶，長度為 200bp~1ooobp;斯氏按蚊擴(kuò)增出8條DNA條帶，長度為250bp一 1400bp。兩種按蚊RApD譜帶具有明顯的種間差異(圖2)，其中有4對遷移率相同的DNA條帶(600bp、430bp、350bp和330bp)。圖2引物P4大劣按蚊和斯氏按蚊基因組DNA隨機(jī)擴(kuò)增結(jié)果 Fig2AmPlifiedresultsofRAPDbyPrimerP4fromgenonueDNAofAn.di、sandAn·StePhensi LaneM:DNAMarker:PCRProduetsalnPlifiedbyPtimerP4(Lanel:An.dirUs:laneZ:An·StePhensi)
【學(xué)位授予單位】：安徽理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R384.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬雅軍,瞿逢伊,徐建農(nóng),鄭哲民;用核糖體DNA鑒別PCR區(qū)分中華按蚊和嗜人按蚊[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1998年03期

2 曲傳智,蘇天增,董濤,史崇敏,王梅英,王仲文,蘇壽lf;間日瘧原蟲在鄭州中華按蚊體內(nèi)的易感性和發(fā)育過程[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2000年05期

3 范岳榮，李玉蘭，倪忠耘，葉炳輝，朱昌亮;嗜人按蚊和中華按蚊蛹的蛋白質(zhì)等生化指標(biāo)的初步研究[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報;1994年02期

4 周華云,高琪,顧政誠,朱國鼎,李菊林,曹俊;PCR-RFLP技術(shù)用于鑒別赫坎按蚊復(fù)合體近緣種按蚊的研究[J];中國血吸蟲病防治雜志;2004年05期

5 許漱璧,譚t熛

本文編號：2537698