【摘要】：的因素，體內胰島素的水平在糖尿病的發(fā)生、發(fā)展中起著決定性的作用。 胰島素作為直接控制血糖水平的激素，其合成、分泌和成熟受很多因素的影響。其中，蛋白原轉換酶1／3(proprotein convertase1／3，，PC1／3)、蛋白原轉換酶2(proprotein convertase2，PC2)在胰島素的翻譯后修飾過程起著十分重要的作用；PC1／3、PC2共表達于β細胞；而在α細胞、δ細胞及PP細胞則只有PC2存在。PC1／3、PC2聯合作用完成了對胰島素的剪切，胰島素原經剪切成為成熟的胰島素和C肽，才能發(fā)揮生理作用。此外，PC1／3、PC2在下丘腦和其它的內分泌器官中也有表達，對ACTH和α-MSH等內分泌肽的成熟起著同樣的作用，PC1、PC2功能障礙將影響體內成熟激素的水平，進而可以影響機體對葡萄糖等物質的代謝過程。 胰高血糖素樣腸肽1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)是由小腸和大腸粘膜上皮的L型內分泌細胞分泌的一種參與調節(jié)血糖水平和短期攝食的內分泌型多肽。L型細胞來源于腸腺窩前體細胞，與胰島的α細胞來源于共同的祖細胞，α細胞分泌的Glucagon和L型細胞分泌的GLP-1受同一基因Proglucagon的調控。研究證明在Proglucagon基因的啟動子序列上有Pax6的結合位點，即Pax6可能影響Proglucagon基因的轉錄調控。 第一部分 ENu誘變和篩選得到Pax6基因突變小鼠 材料和方法： 本研究對191只雄性C57BL／6J近交系小鼠進行ENU化學誘變，獲得3172只G_1代。通過對G_1代進行行為學、形態(tài)學、神經功能、學習記憶、聽力、視覺生理、骨代謝、血糖和心功能等進行監(jiān)測，篩選出595只與人類疾病相關的顯性基因突變個體和117個可遺傳品系，其中包括一個小眼品系DEBA。對此小眼小鼠品系DEBA利用微衛(wèi)星標記技術和分子克隆技術，尋找突變基因，并對突變基因進行測序以確定突變位點，同時通過PCR和酶切的方法建立基因鑒定方法，Western Blot檢測突變基因編碼蛋白的表達。 結果： 1、ENU誘變并篩選得到小眼DEBA小鼠品系。
【圖文】：

基因編碼序列的第1367位的腺普酸(A)突變后變成了胸腺喀睫(T)(圖IC)。通過基因鑒定發(fā)現我們所得到的存活的Pxa6突變小鼠是雜合型的，即雜合子;只有一條染色體發(fā)生突變。進一步用雜合子與雜合子進行交配，后代中出現純合子，而純合子在圍產期內即死亡，沒有眼睛和鼻子，腦子的形態(tài)也異常(圖Bl)。~一一—一一C、A136-7-.T!

別野生型和雜合型小鼠，我們利用CPR和酶切鑒定的方法，合型、純合型小鼠的基因鑒定方法，該Pxa6的突變位點恰點，野生型小鼠PCR產物不能被Hphl切開，跑膠后出現一型小鼠PCR產物帶有突變位點，可被萬肋徹開，從而產生Pb，另一條為120Pb.雜合子由于其一條染色體是野生型，另一現三條帶，530Pb、410Pb、120Pb.(圖A2.)blot結果:白結構由兩個DNA結合結構域PD結構域和HD結構域及一化結構域組成[2l]，由于該突變的發(fā)生引起Pxa6蛋白mani)的最后5個氨基酸和P/S廳結構域缺失，則突變的染色引起純合Pxa6的突變完全不能產生Pxa6蛋白產物，雜合Pxa被翻譯成蛋白，則蛋白表達量減少(圖ID)。v幾ste即Botl果顯示Pxa6突變雜合型小鼠組織中的Pxa6蛋白表達量明顯
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R363

【共引文獻】

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6 陸玉鳳;劉麗梅;;Pax6基因突變與胰腺發(fā)育和糖尿病發(fā)生關系的研究進展[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2011年05期

7 相學軍;陳艷秋;張新蕊;朱必才;;制備遺傳工程小鼠的技術改進[J];生物技術通報;2006年06期

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9 Yoichi Gondo;;Now and future of mouse mutagenesis for human disease models[J];遺傳學報;2010年09期

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本文編號：2537093