【摘要】：的因素，體內(nèi)胰島素的水平在糖尿病的發(fā)生、發(fā)展中起著決定性的作用。 胰島素作為直接控制血糖水平的激素，其合成、分泌和成熟受很多因素的影響。其中，蛋白原轉(zhuǎn)換酶1／3(proprotein convertase1／3，，PC1／3)、蛋白原轉(zhuǎn)換酶2(proprotein convertase2，PC2)在胰島素的翻譯后修飾過(guò)程起著十分重要的作用；PC1／3、PC2共表達(dá)于β細(xì)胞；而在α細(xì)胞、δ細(xì)胞及PP細(xì)胞則只有PC2存在。PC1／3、PC2聯(lián)合作用完成了對(duì)胰島素的剪切，胰島素原經(jīng)剪切成為成熟的胰島素和C肽，才能發(fā)揮生理作用。此外，PC1／3、PC2在下丘腦和其它的內(nèi)分泌器官中也有表達(dá)，對(duì)ACTH和α-MSH等內(nèi)分泌肽的成熟起著同樣的作用，PC1、PC2功能障礙將影響體內(nèi)成熟激素的水平，進(jìn)而可以影響機(jī)體對(duì)葡萄糖等物質(zhì)的代謝過(guò)程。 胰高血糖素樣腸肽1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)是由小腸和大腸粘膜上皮的L型內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的一種參與調(diào)節(jié)血糖水平和短期攝食的內(nèi)分泌型多肽。L型細(xì)胞來(lái)源于腸腺窩前體細(xì)胞，與胰島的α細(xì)胞來(lái)源于共同的祖細(xì)胞，α細(xì)胞分泌的Glucagon和L型細(xì)胞分泌的GLP-1受同一基因Proglucagon的調(diào)控。研究證明在Proglucagon基因的啟動(dòng)子序列上有Pax6的結(jié)合位點(diǎn)，即Pax6可能影響Proglucagon基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。 第一部分 ENu誘變和篩選得到Pax6基因突變小鼠 材料和方法： 本研究對(duì)191只雄性C57BL／6J近交系小鼠進(jìn)行ENU化學(xué)誘變，獲得3172只G_1代。通過(guò)對(duì)G_1代進(jìn)行行為學(xué)、形態(tài)學(xué)、神經(jīng)功能、學(xué)習(xí)記憶、聽(tīng)力、視覺(jué)生理、骨代謝、血糖和心功能等進(jìn)行監(jiān)測(cè)，篩選出595只與人類疾病相關(guān)的顯性基因突變個(gè)體和117個(gè)可遺傳品系，其中包括一個(gè)小眼品系DEBA。對(duì)此小眼小鼠品系DEBA利用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)和分子克隆技術(shù)，尋找突變基因，并對(duì)突變基因進(jìn)行測(cè)序以確定突變位點(diǎn)，同時(shí)通過(guò)PCR和酶切的方法建立基因鑒定方法，Western Blot檢測(cè)突變基因編碼蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1、ENU誘變并篩選得到小眼DEBA小鼠品系。
【圖文】：

基因編碼序列的第1367位的腺普酸(A)突變后變成了胸腺喀睫(T)(圖IC)。通過(guò)基因鑒定發(fā)現(xiàn)我們所得到的存活的Pxa6突變小鼠是雜合型的，即雜合子;只有一條染色體發(fā)生突變。進(jìn)一步用雜合子與雜合子進(jìn)行交配，后代中出現(xiàn)純合子，而純合子在圍產(chǎn)期內(nèi)即死亡，沒(méi)有眼睛和鼻子，腦子的形態(tài)也異常(圖Bl)。~一一—一一C、A136-7-.T!

別野生型和雜合型小鼠，我們利用CPR和酶切鑒定的方法，合型、純合型小鼠的基因鑒定方法，該P(yáng)xa6的突變位點(diǎn)恰點(diǎn)，野生型小鼠PCR產(chǎn)物不能被Hphl切開(kāi)，跑膠后出現(xiàn)一型小鼠PCR產(chǎn)物帶有突變位點(diǎn)，可被萬(wàn)肋徹開(kāi)，從而產(chǎn)生Pb，另一條為120Pb.雜合子由于其一條染色體是野生型，另一現(xiàn)三條帶，530Pb、410Pb、120Pb.(圖A2.)blot結(jié)果:白結(jié)構(gòu)由兩個(gè)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域PD結(jié)構(gòu)域和HD結(jié)構(gòu)域及一化結(jié)構(gòu)域組成[2l]，由于該突變的發(fā)生引起Pxa6蛋白mani)的最后5個(gè)氨基酸和P/S廳結(jié)構(gòu)域缺失，則突變的染色引起純合Pxa6的突變完全不能產(chǎn)生Pxa6蛋白產(chǎn)物，雜合Pxa被翻譯成蛋白，則蛋白表達(dá)量減少(圖ID)。v幾ste即Botl果顯示Pxa6突變雜合型小鼠組織中的Pxa6蛋白表達(dá)量明顯
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2537093