【摘要】：B7-H3是新近發(fā)現(xiàn)的共刺激分子,屬B7超家族成員,為I型跨膜球蛋白,分子量約45～66kD,編碼361個(gè)氨基酸。B7-H3mRNA表達(dá)譜相當(dāng)廣泛,表達(dá)在除外周血淋巴細(xì)胞及骨髓組織外的幾乎所有組織上。在生物學(xué)功能上,B7-H3可促進(jìn)T細(xì)胞活化增殖和IFN-γ的分泌,增強(qiáng)CTL活性,對(duì)TNF-α及IL-8的分泌也有適度促進(jìn)作用。在腫瘤免疫應(yīng)答中,B7-H3信號(hào)能有效的激發(fā)T細(xì)胞特別是激發(fā)CD8~+T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)。但隨后也有研究表明,B7-H3介導(dǎo)的信號(hào)可抑制T細(xì)胞的體外增殖,降低IFN-γ的分泌。此外,B7-H3信號(hào)在骨質(zhì)疏松的發(fā)生、在移植物排斥反應(yīng)(allograft rejection)中都具有重要的調(diào)節(jié)作用。因此,對(duì)該信號(hào)途徑的有效調(diào)節(jié)將不僅為理解復(fù)雜、精細(xì)的免疫應(yīng)答提供新的視角,而且還具有潛在的臨床應(yīng)用前景。本項(xiàng)研究旨在通過(guò)研制B7-H3融合蛋白及特異性單克隆抗體,繼而從不同水平探討B(tài)7-H3分子在免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用和涉及的機(jī)制。 1.人B7-H3分子的克隆、重組蛋白的表達(dá)及其生物學(xué)功能的研究 采用RT-PCR的方法,從人的肺組織克隆得到了人B7-H3的cDNA。以此為模板,利用PCR技術(shù),克隆編碼人B7-H3胞外段的功能區(qū)基因。將測(cè)序正確的該基因裝入原核表達(dá)載體pGEX-5X-3/hB7-H3。然后將該重組載體導(dǎo)入表達(dá)宿主菌BL21(DE3),異丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)產(chǎn)生GST/hB7-H3融合蛋白。經(jīng)過(guò)GST-Sepharose親和層析純化變性復(fù)興后得到的可溶性蛋白,MTT法證明此蛋白對(duì)T淋巴細(xì)胞的體外增殖具有明顯的促進(jìn)作用。ELISA分析發(fā)現(xiàn),該融合蛋白可明顯地提高T細(xì)胞對(duì)INF-γ和IL-10的分泌。 2.鼠抗人B7-H3單抗的制備、特性分析及B7-H3蛋白表達(dá)譜的研究 通過(guò)基因克隆,將編碼人B7-H3分子的cDNA插入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pEGZ-Term。進(jìn)一步通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將重組表達(dá)載體與輔助病毒載體共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T,用其培養(yǎng)上清感染L929細(xì)胞,經(jīng)Zeocin篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)B7-H3分子的L929轉(zhuǎn)基
【圖文】：

人B-7H3分子的克隆、表達(dá)及其生物學(xué)功能的初步研究研究背景sun等人在人B7一H3分子被鑒定的基礎(chǔ)上，克隆得到了小鼠的B7一H3分子[27J。該分子與人B7一H3有88%的同源性。同時(shí)該實(shí)驗(yàn)室還發(fā)現(xiàn)了人B7一H3異構(gòu)體B7一Hb3，而在小鼠并沒有發(fā)現(xiàn)該異構(gòu)體。B7一H3b較B7一H3在胞外段多一對(duì)VC免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，分子量大小約為110Dkazl.728]。

人B-7H3分子的克隆、表達(dá)及其生物學(xué)功能的初步研究研究在最初的研究中發(fā)現(xiàn)，B7一H3能協(xié)同刺激CD+4，CD+ST細(xì)胞的增殖，CTL增加，以及提高INF一分泌的表達(dá)，而且對(duì)IL一8，翎-F。產(chǎn)生也有適度的上調(diào)因此，認(rèn)為B7一H3是一正性調(diào)控分子1261。但在隨后的研究中發(fā)現(xiàn)，，ZglB7一H3和4gIB融合蛋白均可抑制CD+4T淋巴細(xì)胞的體外增殖，下調(diào)T細(xì)胞對(duì)INF一、11一10、ILI一6和IL一8等細(xì)胞因子的分泌卿]。Shu等人通過(guò)建立B7一H3一小鼠模型，在E驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)B7一H3敲基因小鼠體內(nèi)輔助T細(xì)胞難以分化成I型輔助T細(xì)胞;向n型輔助T細(xì)胞正常分化:基因缺陷型小鼠體內(nèi)CD4+，CDS+T細(xì)胞數(shù)量均低生型小鼠。并因此認(rèn)為B7一H3通過(guò)下調(diào)I型輔助T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，下調(diào)機(jī)免疫應(yīng)答[301。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2535362