【摘要】： 非病毒載體制備簡(jiǎn)便、應(yīng)用安全,但轉(zhuǎn)染效率低限制了其應(yīng)用。為了克服此缺點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)采用水流動(dòng)力學(xué)注射方法,將表達(dá)小鼠白細(xì)胞介素-12(IL-12)的質(zhì)粒pCMV-mIL-12通過(guò)尾靜脈快速注入小鼠體內(nèi),于不同時(shí)間點(diǎn)取血及主要器官,應(yīng)用ELISA、PCR、RT-PCR及免疫組織化學(xué)等方法,揭示質(zhì)粒在各組織器官的分布及表達(dá);測(cè)試質(zhì)粒重復(fù)注射的有效性;評(píng)估水流動(dòng)力學(xué)注射對(duì)小鼠的損傷及修復(fù)情況。 結(jié)果顯示,水流動(dòng)力學(xué)注射質(zhì)粒后4小時(shí)即可在血清中檢測(cè)到mIL-12的表達(dá),10小時(shí)達(dá)高峰,3天迅速下降,第7天恢復(fù)到基線值,并且隨著質(zhì)粒劑量的增加,mIL-12的表達(dá)也增加,表達(dá)出的mIL-12可成功地誘導(dǎo)IFN-γ及NO的產(chǎn)生;質(zhì)粒在注射后10小時(shí)及24小時(shí)分布于小鼠的肝臟、脾臟、肺臟和腎臟等器官,第3天則僅存在于肝臟內(nèi);應(yīng)用此方法重復(fù)注射質(zhì)粒可獲得相似水平的mIL-12表達(dá)及NO的產(chǎn)生,但I(xiàn)FN-γ的產(chǎn)生卻明顯減少;水流動(dòng)力學(xué)注射會(huì)引起小鼠肝臟早期出現(xiàn)灶狀出血壞死,此損傷可在1-2周內(nèi)迅速恢復(fù),不會(huì)引起肝臟的纖維化。 因此,水流動(dòng)力學(xué)注射能夠?qū)崿F(xiàn)pCMV-mIL-12質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的高效表達(dá)及重復(fù)注射,是一種新型、簡(jiǎn)單、安全、有效的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)。
【圖文】：

mIL-12 質(zhì)粒在體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中的表達(dá) expression after transfection of cultured cells with pCMand Smmc-7721 cells were transfected with pCMV-mIn, the supernatant was collected for determination of ml cells were not transfected. Data are presented as mean ±-12、IFN-γ 及 NO 的動(dòng)力學(xué)表達(dá)及質(zhì)粒 DNA 劑水流動(dòng)力學(xué)注射后質(zhì)粒的動(dòng)力學(xué)表達(dá)情況，我pCMV-mIL-12 的鹽水溶液，然后于不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)血清中 mIL-12 的含量。結(jié)果如圖 3A 所示，測(cè)到 mIL-12（2111±1028ng/ml），10 小時(shí)達(dá)約為 4 小時(shí)的 9.4 倍，24 小時(shí)僅下降了 5%，但mIL-12 水平僅為 112±97ng/ml，與 10 小時(shí)比有 0.48±0.43ng/ml，第 7 天時(shí)恢復(fù)到基線值質(zhì)粒 DNA 劑量對(duì) mIL-12 表達(dá)的影響，，我們經(jīng)

16圖 2. pCMVβ質(zhì)粒在體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)Fig 2. LacZ expression after transfection of cultured cells with pCMVβ.The cells were transfected with pCMVβ. Forty eight h after transfection, the cells werestained with X-gal staining solution to determine of LacZ expression (D, E, F). Nontransfected cells were used as a control (A, B, C). A and D: Hela cells; B and E: Smmc-7721cells; C and D: MCF-7 cells. Original magnification ×400發(fā)現(xiàn)，盡管注射質(zhì)粒 DNA 的劑量不同，但 mIL-12 的動(dòng)力學(xué)表達(dá)趨勢(shì)卻很一致，即注射后 4 小時(shí)可檢測(cè)到，10 小時(shí)達(dá)高峰，72 小時(shí)迅速下降，第 7 天除 16μg 組略高于基線值外（圖未顯示），其余各組均回復(fù)到基線值。因?yàn)闊o(wú)論注射哪個(gè)劑量，mIL-12 的表達(dá)均在 10 小時(shí)達(dá)到最高水平，因此我們僅比較了不同劑量質(zhì)粒注射后 10 小時(shí)血清中 mIL-12 的濃度。如圖 3B 所示，在
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

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2 李艷茹;張海英;李曉敏;李玉林;王琳;;水流動(dòng)力學(xué)注射方法對(duì)小鼠肝臟的毒性[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2006年04期

本文編號(hào)：2534102