【摘要】：痢疾困擾人類多年，但迄今沒有很好的疫苗，主要是因?yàn)閷λ闹虏C(jī)理了解不夠，擴(kuò)展痢疾的生物學(xué)基礎(chǔ)的研究必將對疫苗研究提供新思路。隨著微生物基因組測序工作的迅速展開，痢疾桿菌福氏2a 2457T和301的全基因組序列現(xiàn)在已經(jīng)完成測定，并且痢疾桿菌福氏2a 2457T的蛋白質(zhì)表達(dá)譜也已經(jīng)建立，這為我們進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是在整體水平研究蛋白質(zhì)表達(dá)與功能，其特點(diǎn)是高通量、獲得的信息量大。我們選擇普遍用于痢疾桿菌遺傳學(xué)與病原學(xué)研究的2457T進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，積累痢疾桿菌的基礎(chǔ)知識并希望能為新疫苗研制找到新的思路。 首先是分別制備2457T全細(xì)胞蛋白與培養(yǎng)液上清中的胞外蛋白，然后通過雙向電泳分離、從電泳凝膠上切取蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切、MALDI-TOF質(zhì)譜檢測肽質(zhì)量指紋圖譜，最后用Mascot軟件在相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫中搜索與之匹配的蛋白質(zhì)。本論文研究內(nèi)容共分兩個(gè)部分，第一部分是驅(qū)除痢疾桿菌福氏2a 2457T的侵襲大質(zhì)粒pINV構(gòu)建新菌株2457T／inc并研究其蛋白質(zhì)組變化；第二部分是研究冷熱休克處理和酸處理對痢疾桿菌福氏2a 2457T蛋白質(zhì)組的影響。我們在這兩部分研究中總共發(fā)現(xiàn)了45個(gè)差異蛋白質(zhì)，其中第一部分有17個(gè)差異蛋白質(zhì)，第二部分有28個(gè)差異蛋白質(zhì)。 在驅(qū)除大質(zhì)粒的的研究中，我們發(fā)現(xiàn)在總共17個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn)中，幾乎所有上調(diào)的蛋白質(zhì)都是與核酸的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)的，，β-內(nèi)酰胺酶除外(它的表達(dá)量上調(diào)是構(gòu)建2457T／inc菌株時(shí)所引入的小質(zhì)粒表達(dá)造成的)。這個(gè)現(xiàn)象向我們提示，驅(qū)除侵襲大質(zhì)粒使得痢疾桿菌的核酸代謝旺盛起來，但是這些高表達(dá)的與核酸代謝相關(guān)的酶和侵襲大質(zhì)粒的關(guān)系還有待于進(jìn)一步研究來驗(yàn)證。由于雙向電泳本身的技術(shù)限制等因素，我們并沒有發(fā)現(xiàn)與痢疾桿菌致病相關(guān)的毒力因子。 在冷熱休克處理和酸處理的研究中，我們發(fā)現(xiàn)總共28個(gè)差異蛋白質(zhì)中變化較
【圖文】：

圖2pH-3lo分離2457T全細(xì)胞蛋白的銀染雙向電泳圖譜Fig.2TheZ一DAPGEmpabaoutWholeeellularProteinexrtactsof.s刀xeneri·UsingPH3一10irnrnobilizedPHgradientdyrstriPnadstainedwithsilverstain.將2457T胞外蛋白質(zhì)也用pH3一10的PIG膠條進(jìn)行雙向電泳，銀染所得電泳圖如圖3。

圖3pH3一10分離2457T胞外蛋白的銀染雙向電泳圖譜F19.3TheZ一DAPGEmpabaoutextrocellularProteinextractsof.S刀xener才.UsingPH3一10immobilizedPHgrdaienidyrstriPnadstained誠thsilverstain.從胞外蛋白質(zhì)的電泳圖上也可以看出痢疾桿菌福氏Za2457T的胞外蛋白也集中分布在pH4一7之間，并且胞外的蛋白質(zhì)明顯少于胞內(nèi)蛋白質(zhì)。在pH3一10的雙向電泳圖譜中發(fā)現(xiàn)2457T的可溶性蛋白質(zhì)大部分集中在pH4一7，而且在pH3一10的凝膠上蛋白質(zhì)點(diǎn)過于密集，不便于切膠取點(diǎn)鑒定，決定用pH4一7的PIG膠條進(jìn)一步分離蛋白。圖4顯示的是pH4一7的痢疾桿菌福氏Za2457T的胞內(nèi)蛋白雙向電泳的銀染圖。
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R378.25

【參考文獻(xiàn)】

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1 謝玲,應(yīng)萬濤,張開泰,項(xiàng)小瓊,錢小紅,王玉芝,吳德昌;雙向電泳和肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)鑒定支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白質(zhì)ANX1-human[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2000年05期

2 馮爾玲,廖翔,王恒j,史兆興,蘇國富,黃留玉;驅(qū)除痢疾桿菌侵襲大質(zhì)粒的新方法[J];微生物學(xué)通報(bào);2003年03期

本文編號：2528278