【摘要】： 近來發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性阿片肽牛腎上腺髓質(zhì)22肽(Bovine adrenal medulla 22，BAM22)除了與μ-、δ-和κ-阿片受體結(jié)合之外，還能與感覺神經(jīng)元特異性受體(sensoryneuron-specific receptor，SNSR)結(jié)合。這些研究表明BAM22可能是一個(gè)重要的內(nèi)源性阿片肽。然而，BAM22在嚙齒類動(dòng)物脊髓水平的分布至今仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)探討B(tài)AM22在大鼠脊髓背角和背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion，DRG)中的分布和細(xì)胞學(xué)定位。方法：(1)采用大鼠一側(cè)后足掌皮下注射完全弗氏佐劑(Complete Freund's adjuvant，CFA)建立炎性痛模型。將SD雄性大鼠(250-270 g)隨機(jī)分為對(duì)照組(saline組，n=6)和實(shí)驗(yàn)組(CFA組，n=6)。運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了正常和CFA炎癥大鼠脊髓背角及DRG中BAM22的表達(dá)。同時(shí)用雙標(biāo)免疫組化方法對(duì)炎癥鼠的脊髓背角Fos和BAM22的共存關(guān)系進(jìn)行研究。(2)對(duì)CFA炎癥大鼠鞘內(nèi)注射BAM22特異性抗體，分為對(duì)照組(saline組，n=7)和實(shí)驗(yàn)組(BAM22抗體組，n=7)。觀察BAM22特異性抗體對(duì)CFA炎癥模型大鼠機(jī)械性刺激閾值的影響，探討內(nèi)源性BAM22在炎癥過程中的生理作用。(3)對(duì)大鼠實(shí)施機(jī)械性背根切斷手術(shù)，分為假手術(shù)組(n=5)和手術(shù)組(n=5)。運(yùn)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)了大鼠脊髓背角中BAM22的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)BAM22主要表達(dá)于大鼠脊髓背角淺層和DRG中；(2)BAM22主要存在于中、小型DRG神經(jīng)元中。19％DRG神經(jīng)元表達(dá)BAM22。(3)切斷背根后，脊髓背角淺層BAM22的表達(dá)下降了85％。提示BAM22主要存在于初級(jí)傳入的中樞突，，是由DRG神經(jīng)元合成而來。(4)足底注射CFA產(chǎn)生外周炎癥后，BAM22在脊髓背角淺層和DRG神經(jīng)元中的表達(dá)均顯著性上調(diào)，大約增加了2倍。(5)雙標(biāo)結(jié)果表明：在脊髓背角的Fos陽性細(xì)胞核周圍有BAM22包繞，且與淺層BAM22纖維緊密聯(lián)結(jié)。(6)鞘內(nèi)注射BAM22抗體后，CFA誘導(dǎo)的大鼠機(jī)械痛覺過敏癥狀增強(qiáng)了。結(jié)果表明：脊髓背角和DRG中的BAM22參與了傷害性信息的傳遞。也提示：BAM22可能是DRG傳入纖維中樞端阿片受體和SNSR的內(nèi)源性配體。
【圖文】：

接降低Ca2+電導(dǎo)，關(guān)閉C末梢上的ca2+通道，或間接地由于K+電導(dǎo)的增加，減少ca2+進(jìn)入c傳入末梢，阻止興奮性遞質(zhì)如P物質(zhì)和谷氨酸的釋放，從而通過突觸前抑制抑制了背角痛敏神經(jīng)元的活動(dòng)(見圖1一l)。在大鼠脊髓背角，許多研究1108一“2】利用電生理技術(shù)觀察到內(nèi)源性阿片膚(OFQ、ENK、EM和Dyn一A)及阿片受體激動(dòng)劑可分別通過作用于初級(jí)傳入終末上的孤啡膚受體以及戶一、6一、K一受體，使興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Glu的釋放量減少，從而抑制興奮性突觸傳遞。另有研究l科，45]證明，阿片膚能增加背角傷害性神經(jīng)元的K+電導(dǎo)，使膜超極化，抑制神經(jīng)元的活動(dòng)，產(chǎn)生突觸后抑制(見圖1一1)。有人(Luo等2001;Jeftinija

pAGRVM圖1一 2pAG(中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì))和RvM(延髓吻端腹內(nèi)側(cè)區(qū))內(nèi)局部神經(jīng)元回路示意圖[l2z]Figl一 2SchematierePresentationofsignalingPathwaysof10calPAG(Periaqueduetalgray)andRVM(rostral ventromedialmedullar)neurons L6SNSR的結(jié)構(gòu)與分布原位雜交(ISH)分析表明人和大鼠的 sNSRmRNA僅在背根神經(jīng)節(jié)(DRG)和三叉神經(jīng)節(jié)表達(dá)ls9】。人和大鼠的SNSR組成一族預(yù)計(jì)有7個(gè)a-螺旋跨膜域，帶高度保守基序的新的G蛋白偶聯(lián)受體。用BAM22片段和其他proenkephalinA來源的膚如E膚(BAM3200或BAM(1一25))進(jìn)行的結(jié)構(gòu)一功能研究表明:激活SNSR所需的結(jié)構(gòu)與激活阿片受體所需的是不同的。經(jīng)典的阿片Met一enkephalin基序YGGFM在激活SNSR的作用中是不需要的(Met一enkePhalin基序是激活阿片受體所需的結(jié)構(gòu))。免疫組織化學(xué)雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確了SNSR的分布范圍。發(fā)現(xiàn)其主要是分布在IB4+的小型傷害性感受器。這類感受器是傳遞傷害性刺激的無髓纖維(C纖維)的兩大類之一(見圖1一3)。大部分小型傷害性感受器能感受傷害性機(jī)械、熱和化學(xué)刺激，主要被分為兩大類:sP/eoRp門rrkA類型和IB4+類型[40]。sNsR主要分布于IB4+型DRo細(xì)胞。SNsR能被BAMS一22和BAM22有效的激活。BAM22，前腦啡膚原經(jīng)蛋白水解酶裂解產(chǎn)
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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1 王小麗,張亦農(nóng),李和;后根切斷術(shù)及辣椒素對(duì)大鼠脊髓后角δ阿片受體免疫反應(yīng)性的影響[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年05期

本文編號(hào)：2524635