【摘要】：超抗原是一種強(qiáng)大的T細(xì)胞激活劑,與普通抗原不同,超抗原無(wú)需抗原提成細(xì)胞的加工處理,即可以完整蛋白形式一端結(jié)合于MHCⅡ類分子肽結(jié)合槽的外側(cè),另一端結(jié)合于T細(xì)胞表面的TCR Vβ區(qū),因此微量的超抗原便可以激活5%-20%的T細(xì)胞。超抗原的這種強(qiáng)大的免疫激活能力,使人們一直在嘗試將超抗原應(yīng)用于腫瘤免疫治療,試圖借助超抗原這一“外力”,以提高機(jī)體本身抗腫瘤免疫能力,并在實(shí)驗(yàn)中取得良好的效果。但在對(duì)超抗原的研究中發(fā)現(xiàn),超抗原在激活T細(xì)胞后,會(huì)出現(xiàn)T細(xì)胞凋亡和無(wú)能現(xiàn)象,導(dǎo)致對(duì)超抗原的再刺激反應(yīng)性降低。超抗原的這種能夠引起免疫耐受的特點(diǎn),限制了其在腫瘤治療中的療效。SEA是由葡萄球菌產(chǎn)生的一種外毒素,為目前研究最廣泛的一種超抗原,也是唯一進(jìn)入腫瘤治療臨床試驗(yàn)的超抗原。為了明確SEA體內(nèi)作用后誘導(dǎo)T細(xì)胞反應(yīng)的規(guī)律,指導(dǎo)SEA腫瘤治療用藥方式,以提高SEA腫瘤治療療效,本研究首先克隆SEA基因、構(gòu)建SEA的原核表達(dá)載體,得到具有活性
【圖文】：

合于T細(xì)胞表面TcR可變區(qū)的p鏈(vp)5]I。與普通抗原不同，超抗原不需要抗原遞呈細(xì)胞(APC)s的內(nèi)化和處理，，以完整蛋白形式結(jié)合于MHCll膚結(jié)合槽的外側(cè)(圖2)。超抗原具有MHC依賴性，但沒有MHC限制性，[e7](表2)。即APC的MHc等位基因不一定要與T細(xì)胞的等位機(jī)因相符，甚至異基因的MHCll分子也可起作用。超抗原通常于MHC11相聯(lián)系后以更大的親和力與TCR相結(jié)合，MHCll一SAg一TCR三合體的形式使每一個(gè)二合體的相互聯(lián)系更加穩(wěn)定。盡管有報(bào)道超抗原如SEB可以直接激活MHCll一T細(xì)胞克隆和雜交瘤中的Vp3十T細(xì)胞亞群，但總的來(lái)說(shuō)，MHCll在與超抗原結(jié)合和隨后T細(xì)胞的激活中起到非常重要的作用[8]圖2超抗原作用機(jī)制示意圖Fig2ThemeehanismofsuPernatigeninteraetionwithTCRandMHCll一!4?

2.1SEA基因的克隆采用PCR從葡萄球菌FUI100的中擴(kuò)增出約為700bp的片段，與編碼SEA成熟蛋白基因片斷大小一致，結(jié)果見圖1一1。將700Pb片段插入pUC19的Ec口Rl和刀。腳Hl之間，篩選陽(yáng)性克隆，經(jīng)酶切鑒定后，經(jīng)測(cè)序，其序列與GneeBnak公布的一致。Note:1.200bPDNALdader2.SEAPCR產(chǎn)物圖1一1PcR的瓊脂糖電泳結(jié)果Figl一1theagaorseeleetorPhoers應(yīng)5ofPCRPorduCt2.2SEA的原核表達(dá)及分離純化五沁口Rl和刀公腳Hl雙酶切pUC19一sAE質(zhì)粒和pGEx一4-T1空載體，電泳，回收目的片段和載體，T4連接酶連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5a，篩選陽(yáng)性克隆。構(gòu)建sEA原核表達(dá)載體pGEX一SAE。酶切鑒定結(jié)果見圖1一2。一41一
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2520943