【摘要】：超抗原是一種強大的T細胞激活劑,與普通抗原不同,超抗原無需抗原提成細胞的加工處理,即可以完整蛋白形式一端結合于MHCⅡ類分子肽結合槽的外側,另一端結合于T細胞表面的TCR Vβ區(qū),因此微量的超抗原便可以激活5%-20%的T細胞。超抗原的這種強大的免疫激活能力,使人們一直在嘗試將超抗原應用于腫瘤免疫治療,試圖借助超抗原這一“外力”,以提高機體本身抗腫瘤免疫能力,并在實驗中取得良好的效果。但在對超抗原的研究中發(fā)現(xiàn),超抗原在激活T細胞后,會出現(xiàn)T細胞凋亡和無能現(xiàn)象,導致對超抗原的再刺激反應性降低。超抗原的這種能夠引起免疫耐受的特點,限制了其在腫瘤治療中的療效。SEA是由葡萄球菌產生的一種外毒素,為目前研究最廣泛的一種超抗原,也是唯一進入腫瘤治療臨床試驗的超抗原。為了明確SEA體內作用后誘導T細胞反應的規(guī)律,指導SEA腫瘤治療用藥方式,以提高SEA腫瘤治療療效,本研究首先克隆SEA基因、構建SEA的原核表達載體,得到具有活性
【圖文】：

合于T細胞表面TcR可變區(qū)的p鏈(vp)5]I。與普通抗原不同，超抗原不需要抗原遞呈細胞(APC)s的內化和處理，，以完整蛋白形式結合于MHCll膚結合槽的外側(圖2)。超抗原具有MHC依賴性，但沒有MHC限制性，[e7](表2)。即APC的MHc等位基因不一定要與T細胞的等位機因相符，甚至異基因的MHCll分子也可起作用。超抗原通常于MHC11相聯(lián)系后以更大的親和力與TCR相結合，MHCll一SAg一TCR三合體的形式使每一個二合體的相互聯(lián)系更加穩(wěn)定。盡管有報道超抗原如SEB可以直接激活MHCll一T細胞克隆和雜交瘤中的Vp3十T細胞亞群，但總的來說，MHCll在與超抗原結合和隨后T細胞的激活中起到非常重要的作用[8]圖2超抗原作用機制示意圖Fig2ThemeehanismofsuPernatigeninteraetionwithTCRandMHCll一!4?

2.1SEA基因的克隆采用PCR從葡萄球菌FUI100的中擴增出約為700bp的片段，與編碼SEA成熟蛋白基因片斷大小一致，結果見圖1一1。將700Pb片段插入pUC19的Ec口Rl和刀。腳Hl之間，篩選陽性克隆，經酶切鑒定后，經測序，其序列與GneeBnak公布的一致。Note:1.200bPDNALdader2.SEAPCR產物圖1一1PcR的瓊脂糖電泳結果Figl一1theagaorseeleetorPhoers應5ofPCRPorduCt2.2SEA的原核表達及分離純化五沁口Rl和刀公腳Hl雙酶切pUC19一sAE質粒和pGEx一4-T1空載體，電泳，回收目的片段和載體，T4連接酶連接，轉化感受態(tài)DH5a，篩選陽性克隆。構建sEA原核表達載體pGEX一SAE。酶切鑒定結果見圖1一2。一41一
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R392

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本文編號：2520943