【摘要】：近年來(lái)受到人口流動(dòng)性加大、人口老齡化、過(guò)分依賴卡介苗、人免疫缺陷病毒(HIV)與結(jié)核分支桿菌共感染、毒品及女性吸煙等諸多因素的影響,結(jié)核病死灰復(fù)燃,全球呈大回升之勢(shì)。結(jié)核分支桿菌耐藥性的產(chǎn)生和傳播更加劇了結(jié)核病的流行。作為標(biāo)準(zhǔn)化療的一線藥物,利福平和異煙肼在結(jié)核病的治療中發(fā)揮了重要的作用。然而,由于對(duì)這兩種藥物耐藥株的產(chǎn)生使其聯(lián)合治療的有效率降低到77%�？焖�、準(zhǔn)確的檢測(cè)菌株的耐藥情況不僅有助于選擇最適的治療方案繼而提高治療效果,而且有助于阻止耐藥菌株的傳播,因而具有非常重要的意義。研究表明,異煙肼耐藥株的產(chǎn)生是由katG、inhA、kasA、ahpC、ndh等多基因控制的。其中,60%-70%的耐藥株是由于katG基因第315位密碼子突變所致,且這一突變與高耐藥量密切相關(guān)。因此,katG基因是異煙肼耐藥性檢測(cè)的首選基因。利福平的耐藥機(jī)制主要是由于編碼RNA多聚酶β-亞基的rpoB基因發(fā)生突變,導(dǎo)致利福平無(wú)法與RNA聚合酶結(jié)合,引起結(jié)核分支桿菌耐藥。約有90%～95%的利福平耐藥株存在rpoB基因的突變,且均集中在編碼511-533位共23個(gè)氨基酸的69bp核心突變區(qū),因此,通過(guò)對(duì)該區(qū)域基因序列的分析可以檢測(cè)對(duì)利福平的耐藥性。而在各個(gè)國(guó)家和地區(qū),這些位點(diǎn)突變的幾率均有差異,在我國(guó),最近一篇文獻(xiàn)報(bào)道,在利福平耐藥的結(jié)核分支桿菌中,526位突變占40%,531位突變占41%,516位突變僅占4%。 我國(guó)結(jié)核分支桿菌耐多藥情況同樣令人擔(dān)憂:初始耐藥率為28.1%,繼發(fā)耐藥率為41.1%,并且均以耐異煙肼、利福平一線藥物為主,耐多藥(MDR)現(xiàn)象嚴(yán)重,所以耐藥性問(wèn)題己構(gòu)成了對(duì)結(jié)核病控制規(guī)劃的嚴(yán)重威脅。因此對(duì)抗結(jié)核藥物耐藥性進(jìn)行系統(tǒng)研究和檢測(cè),建立先進(jìn)的耐藥性測(cè)定方法,以指導(dǎo)結(jié)核病的防治具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。 開(kāi)展這方面的研究,準(zhǔn)確,全面的檢測(cè)katG、rpoB基因突變十分必要。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道多種分子生物學(xué)檢測(cè)方法用于檢測(cè)這兩個(gè)基因的突變,如SSCP法,RFLP法,實(shí)時(shí)PCR法,線性探針雜交法:這些方法都有自身的優(yōu)缺點(diǎn),且大部分不能同時(shí)對(duì)katG、rpoB基因突變進(jìn)行撿測(cè)。目前,國(guó)際上已有商業(yè)化的INNO-LiPA Rif TB檢測(cè)試劑盒(比利時(shí)Innogenetics NN公司)可以檢測(cè)出rpoB基因第531位、第526位四種耐藥突變,具有簡(jiǎn)便、快捷,特異性、敏感性較強(qiáng)的特點(diǎn),臨床指導(dǎo)用藥效果良
【圖文】：

圖139#樣本的DNA測(cè)序結(jié)果注:用Pl引物進(jìn)行單鏈測(cè)序，315位突變處用下劃線表示，為gac一aac突變，氨基酸由Ser突變?yōu)門(mén)hr。S匆naIG:599A:599TBD3T嘆B)口卜1.n優(yōu)白H付以幻7尸d川51125ot27印:179C:516Pk11工(:1071內(nèi)弟，Of，入拍3If12’舊，，’14:07以幻3ff12’唱礦:955S伸cl叩:，.03次，.033)

R質(zhì)粒PRC產(chǎn)物在65℃的條件下與膜條在雜交爐中雜交:克隆katG基因3巧位發(fā)生AGC~ACC突變的質(zhì)粒條在顯色液中顯色的時(shí)間為Zmni雜交的最適溫度，以降低非特異性雜交。用R應(yīng)該是能與PRC產(chǎn)物雜交的R探針顯色，而其都不能與CPR擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，因而都不能顯色。GCATS探針的序列為ACGCGACCAGCAGCG(匯AT，用R堿基用黑體標(biāo)出。設(shè)計(jì)51、Rl探針的目的主要片中非特異性明顯，須進(jìn)一步提高雜交的溫度。5R51RIS探針為
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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1 王文 ,潘衛(wèi) ,戚中田 ,金維榮 ,嚴(yán)然 ,蘇蓓 ,翁心華 ,陳澍 ,張文宏 ,盧洪洲;逆向點(diǎn)雜交方法檢測(cè)耐利福平結(jié)核分支桿菌rpoB基因突變[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年10期

2 吳雪瓊,張俊仙,胡忠義,莊玉輝,靳安佳,張曉剛,李國(guó)利;ahpC基因突變與結(jié)核分支桿菌耐異煙肼的研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1998年12期

本文編號(hào)：2520152