【摘要】：目的 1．建立昆明種胚胎小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定技術(shù)。 2．探討肝細(xì)胞生長因子(HGF)對神經(jīng)干細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用。 方法 將孕14天小鼠引頸處死，分離取出胚鼠大腦皮層，制成單細(xì)胞懸液，采用無血清培養(yǎng)法，，在表皮生長因子(EGF)和堿性成纖維生長因子(bFGF)作用下培養(yǎng)，觀察不同階段的神經(jīng)干細(xì)胞生長情況。連續(xù)傳代，傳至第三代后，加入不同濃度的肝細(xì)胞生長因子(HGF)，觀察神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況。用免疫熒光技術(shù)對神經(jīng)干細(xì)胞及分化情況進(jìn)行鑒定，并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果 從胚胎小鼠大腦皮層中分離培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞能快速增殖形成懸浮生長的細(xì)胞團(tuán)。經(jīng)免疫熒光技術(shù)鑒定，細(xì)胞團(tuán)Nestin抗體標(biāo)記陽性且原代及傳代細(xì)胞團(tuán)Nestin抗體標(biāo)記陽性細(xì)胞比例無明顯變化(P＞0.05)，誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞NSE和GFAP標(biāo)記陽性。 去除表皮生長因子(EGF)和堿性成纖維生長因子(bFGF)，加入不同濃度HGF，并誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化。用免疫熒光技術(shù)對神經(jīng)干細(xì)胞的分化情況進(jìn)行檢測，計算NSE和GFAP陽性細(xì)胞率。實驗表明隨著HGF濃度逐漸增高，NSE陽性細(xì)胞率也逐漸增高，HGF組NSE陽性細(xì)胞率與對照組有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＜0.05)，且同一濃度組中的NSE陽性細(xì)胞率較GFAP陽性細(xì)胞率有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論 證實從胚胎小鼠大腦皮層分離培養(yǎng)出的細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞，表明體外培養(yǎng)體系中培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)傳代培養(yǎng)后仍保持能干細(xì)胞的特性。HGF能誘導(dǎo)胚胎小鼠神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化，且具有劑量依賴性。
【圖文】：

孕鼠的串珠樣子宮

胚胎小鼠
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R329

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2519930