發(fā)布時間：2019-07-17 10:56

【摘要】： 【目的】：1．研究豬苓多糖(polyporus polysaccharide，PPS)協(xié)同卡介苗(bacillus calmette guerin，BCG)誘導小鼠腹腔巨噬細胞TLR2、TLR4、CD14、黏附分子及共刺激分子的表達，核轉錄因子NF-κB的激活，炎癥因子的表達，探討其誘導的免疫應答啟動機制。2．研究卡介苗在人膀胱癌細胞株T24中的直接作用部位和對T24超微結構的影響，及豬苓多糖對其的協(xié)同作用。 【方法】：1．實驗分組，每組18只NIH小鼠(26-28g)：①對照組(皮下注射生理鹽水0.1ml／只)②BCG組(皮下注射BCG懸液1mg／只)③B+P組(BCG給藥同前，同時腹腔注射PPS 2mg／只，)④PPS組(腹腔注射PPS 2mg／只)。分別在給藥后2小時，12小時，24小時從每組各抽取6只小鼠，處死后收集小鼠腹腔巨噬細胞。 2．應用流式細胞術觀察PPS、BCG刺激后小鼠腹腔巨噬細胞TLR2，TLR4，CD14，CD11b，CD40的表達情況。3．用間接熒光法對PPS、BCG免疫后的小鼠腹腔巨噬細胞進行染色，利用激光共聚焦顯微鏡技術，觀察核轉錄因子NF-κB分子，在胞漿和胞核表達的變化以及其轉移的情況。4．運用ELISA技術，檢測PPS、BCG免疫后的小鼠腹腔巨噬細胞上清液中IL-1β、IL-12和IL-10，脾臟勻漿液中IL-2和IL-4及外周血清TNF-α的含量。5．用透射電鏡和掃描電鏡技術觀察BCG在T24中的作用部位，對T24超微結構的影響，及PPS的協(xié)同作用。6．實驗數(shù)據(jù)使用PEMS 3.0統(tǒng)計分析軟件分別進行多個均數(shù)比較分析。 【結果】：1．PPS協(xié)同BCG體內刺激對小鼠腹腔巨噬細胞TLRs表達的影響：(1)PPS組12h巨噬細胞TLR2表達高于對照組(P＜0.05)，24h后下降。B+P組2h后TLR2表達高于PPS和BCG單用組(P＜0.05)，12h之后下降。(2)PPS組小鼠巨噬細胞TLR4表達在3個時點無明顯變化，在12h、24h低于對照組(P＜0.05)。B+P組2h后TLR4表達高于PPS和BCG單用組(P＜0.05)。(3)PPS組小鼠巨噬細胞CD14表達在3個時點無明顯變化，在12h、24h低于對照組(P＜0.05)。B+P組2h后CD14表達高于PPS和BCG單用組(P＜0.05)，之后下降。 2．PPS協(xié)同BCG體內刺激對小鼠腹腔巨噬細胞共刺激分子表達的影響：(1)PPS組12h小鼠巨噬細胞CD11b表達高于對照組(P＜0.05)，24h后下降。B+P組2h和12h CD11b表達高于PPS和BCG單用組(P＜0.05)，之后下降。 (2) PPS組小鼠巨噬細胞CD40表達在3個時點無明顯變化，在2h、12h低于對照組(P＜0.05)。B+P組2h后CD40表達高于PPS(P＜0.05)。 3．PPS協(xié)同BCG體內刺激對小鼠腹腔巨噬細胞NF-κB活化的影響：(1)PPS組NF-κB胞核熒光強度在3個時點內緩慢上升，但均低于對照組(P＜0.05)；B+P組NF-κB胞核熒光強度高于PPS組(P＜0.05)，在12h明顯增強，，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。(2)PPS組NF-κB胞漿熒光強度在3個時點呈上升趨勢，但均低于對照組(P＜0.05)；B+P組NF-κB胞漿熒光強度在2b和12h高于PPS組(P＜0.05)，在12h明顯增強。(3)PPS組NF-κB核漿熒光強度比在3個時點呈下降趨勢，24h低于對照(P＜0.05)；B+P組NF-κB核漿熒光強度比在24h明顯上升，高于PPS組和對照組(P＜0.05)。 4．PPS協(xié)同BCG體內刺激對小鼠腹腔巨噬細胞細胞因子分泌的影響：(1)PPS組2h小鼠腹腔巨噬細胞IL-1β分泌高于對照組(P＜0.05)，B+P組IL-1β分泌低于PPS組，在2h和24h有統(tǒng)計意義(P＜0.05)。(2)PPS組小鼠脾勻漿上清中IL-4含量在3個時點變化不明顯，低于對照組，但無統(tǒng)計意義。B+P組IL-4含量與PPS組相近，差異無統(tǒng)計意義。(3)小鼠腹腔巨噬細胞上清中未檢測到IL-12，IL-10和脾勻漿液中的IL-2，外周血清的TNF-α。 5．BCG對T24的直接作用及形態(tài)學觀察：BCG組2h細胞表面球狀顆粒增多，胞膜不光整，BCG與癌細胞作用24小時，細胞表面微絨毛減少，有的腫脹，長突起大部分消失，小球狀結構增多。與PPS聯(lián)合組細胞表面出現(xiàn)較多粗的突起物。BCG被吞入胞漿或胞核，線粒體腫脹，胞漿胞核物質丟失，細胞呈溶解趨勢。 綜上所述：1．PPS體內單獨刺激不能促進TLR分子的表達，聯(lián)合BCG可產生協(xié)同作用并促進TLR分子和CD14的表達。2．PPS協(xié)同BCG可以促進黏附分子CD11b分子的表達。3．PPS協(xié)同BCG作用24h促使NF-κBp65向核內轉移。4．PPS、BCG作用初期(24h)尚不能顯著誘導炎癥因子的釋放。5．BCG對膀胱癌細胞有直接損傷作用，PPS有協(xié)同作用。 【結論】：豬苓多糖協(xié)同卡介苗作用初期能促進巨噬細胞表面CD14、TLR2和TLR4分子，及黏附分子CD11b表達增加，激活NF-κBp65，TLR分子及信號通路可能作為主要途徑之一介導PPS和BCG啟動機體免疫進而引發(fā)抗腫瘤效應。另外，BCG還可以通過直接損傷腫瘤細胞，釋放出致炎物，參與免疫啟動過程。
文內圖片：
圖片說明： 1.即S組N卜KB胞核熒光強度在3個時點內緩慢上升，但均低于對照組(尸<0.05);B+P組N戶K日胞核熒光強度高于PPS組(尸<0.05)，在12h明顯增強，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。(見表2一1，圖2一1)2.即S組N卜KB胞漿熒光強度在3個時點呈上升趨勢，但均低于對照組(尸<0.05);B+P組NF一KB胞核熒光強度在Zh和12h高于PPS組(P<0.05)，在12h明顯增強。(見表2一2，圖2一2)3.PPS組NF一KB核漿熒光強度比在3個時點呈下降趨勢，24h低于對照(尸<0.05);B+P組NF一KB核漿熒光強度比在24h明顯上升，高于PPS組和對照組(尸<0.05)。(見表2一3，圖2一3)表2一 1NF一KB在胞核內的表達(萬士s，n=6)grollPdose(mg/只)胞核熒光強度(Fn) Zh12h24heontrol 114.88士 19.43119.86士32.8 71.58士11.06*59.72士11.77*99.73士19.59今147.9士25.26*令65.42士1.87*74.77士9.17*138.73士43.55 0.1 0.1/0.2 0.210113961士 11.86*87士10.91今85.76士10.84*匕六PQ口七門DI+ BBpi*只 0.05vseontrol
文內圖片：
圖片說明： 1.即S組N卜KB胞核熒光強度在3個時點內緩慢上升，但均低于對照組(尸<0.05);B+P組N戶K日胞核熒光強度高于PPS組(尸<0.05)，在12h明顯增強，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。(見表2一1，圖2一1)2.即S組N卜KB胞漿熒光強度在3個時點呈上升趨勢，但均低于對照組(尸<0.05);B+P組NF一KB胞核熒光強度在Zh和12h高于PPS組(P<0.05)，在12h明顯增強。(見表2一2，圖2一2)3.PPS組NF一KB核漿熒光強度比在3個時點呈下降趨勢，24h低于對照(尸<0.05);B+P組NF一KB核漿熒光強度比在24h明顯上升，高于PPS組和對照組(尸<0.05)。(見表2一3，圖2一3)表2一 1NF一KB在胞核內的表達(萬士s，n=6)grollPdose(mg/只)胞核熒光強度(Fn) Zh12h24heontrol 114.88士 19.43119.86士32.8 71.58士11.06*59.72士11.77*99.73士19.59今147.9士25.26*令65.42士1.87*74.77士9.17*138.73士43.55 0.1 0.1/0.2 0.210113961士 11.86*87士10.91今85.76士10.84*匕六PQ口七門DI+ BBpi*只 0.05vseontrol
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張俊才,簡子健,鄧普輝,侯順利,曾發(fā)貴,馬正海,陳國利;不同佐劑對卡介苗的免疫增強作用[J];動物醫(yī)學進展;2003年05期

2 馬興銘,趙進昌;中藥多糖對小鼠巨噬細胞功能影響的比較[J];甘肅中醫(yī)學院學報;2000年04期

3 胡名柏;楊國梁;;豬苓多糖對受輻射損傷的大白鼠造血功能及免疫功能的促進作用[J];湖北醫(yī)科大學學報;1996年01期

4 張佩，金麗杰;豬苓多糖對白細胞介素─1產生的影響[J];錦州醫(yī)學院學報;1995年02期

5 曾星;王鎵;蔡萃;黃羽;張嫻;;TLR介導BCG和豬苓多糖激活巨噬細胞株J774 NF-κB的表達[J];免疫學雜志;2006年05期

6 江恩利;趙霞;;CD40-CD40L與腫瘤[J];四川腫瘤防治;2006年01期

7 侯敢,黃迪南,祝其鋒;豬苓多糖對巨噬細胞一氧化氮生成和細胞內還原型谷胱甘肽的影響[J];上海免疫學雜志;2001年02期

8 富寧;Toll樣受體與病原相關分子模式[J];上海免疫學雜志;2001年04期

9 賴潭,周興,李傳印;BCG誘導膀胱癌細胞凋亡的實驗研究及膀胱癌高危復發(fā)患者預防灌注的臨床觀察[J];實用醫(yī)學雜志;2002年11期

10 梅玉屏,曾星,黃羽,黃建華;重組卡介苗及豬苓多糖對荷瘤小鼠巨噬細胞NO釋放量的影響[J];細胞與分子免疫學雜志;2002年03期

本文編號：2515439