【摘要】： 馬爾尼菲青霉菌(Penicillium marneffei)是目前已知300余種青霉菌中唯一具有溫度敏感的兩相致病菌。它廣泛分布于中國南部及東南亞地區(qū),能引起呼吸道、皮膚以及系統(tǒng)性霉菌病,特別是在免疫功能低下和艾滋病病毒感染的患者中。隨著艾滋病在全世界范圍的蔓延,馬爾尼菲青霉菌引起的急性系統(tǒng)性或播散性感染明顯增加,已成為影響未來公眾健康的潛在條件致病真菌。 為更好的探討馬爾尼菲青霉菌的致病機制,識別其潛在的抗菌靶位,有必要對馬爾尼菲青霉菌中一些與致病相關(guān)的重要基因進行深入的功能研究。然而,傳統(tǒng)的基因功能研究方法低效且繁瑣,給在真菌中開展大規(guī)模的基因功能研究帶來了困難。近來,RNAi技術(shù)作為特異、高效、簡便地基因功能研究方法給這些問題的解決帶來了希望。本研究首次嘗試了在馬爾尼菲青霉菌中建立基于RNAi技術(shù)的基因功能研究平臺。 Rho GTP酶(Rho GTPase)可能在控制細胞極性生長發(fā)育方面有著重要的作用,因而成為本研究的關(guān)注重點,即構(gòu)建針對Rho GTPase上游激活因子的干擾載體,通過沉默Rho GTPase激活因子來初步探討馬爾尼菲青霉菌中RhoGTPase的功能。 本研究構(gòu)建以xylp為啟動子,靶基因的正反雙向序列被550bpGUS序列隔開的發(fā)夾結(jié)構(gòu)載體PCB309A-XRGT,沉默靶基因。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)化馬爾尼菲青霉,以博萊霉素為抗性標(biāo)記進行突變子的篩選。結(jié)果表明,RhoGTPase激活因子的基因干擾后馬爾尼菲青霉菌絲生長受到抑制,菌落明顯變小,這與野生型相比發(fā)生顯著變化。RT-PCR也檢測到該基因mRNA水平的降低。 鑒于Rho GTPase在生物中的重要作用和轉(zhuǎn)錄基因沉默體系得建立,我們對其基因功能進行了初步的探討。推測該基因在馬爾尼菲青霉菌菌落的形態(tài)形成過程有著重要的調(diào)控作用。 這是首次成功應(yīng)用RNAi技術(shù),利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法研究馬爾尼菲青霉中的重要基因功能,為深入研究Rho GTPase在馬爾尼菲青霉菌的致病機制中所扮演角色提供技術(shù)手段,同時也為大規(guī)模地研究馬爾尼菲青霉菌基因功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Penicillium marneffei is the only temperature-sensitive two-phase pathogenic bacteria in more than 300 species of Penicillium. It is widely distributed in southern China and Southeast Asia, which can cause respiratory, skin and systemic mycosis, especially in patients with low immune function and HIV infection. With the spread of AIDS around the world, acute systemic or disseminated infections caused by Penicillium marneffei have significantly increased and have become a potential condition-causing fungus that has an impact on the future public health. In order to study the pathogenesis of Penicillium marneffei and identify its potential antibacterial target, it is necessary to carry out in-depth function of some important genes related to the pathogenesis of Penicillium marneffei. However, the traditional gene function research method is inefficient and tedious, and brings about a large-scale gene function research in the fungus. In recent years, RNAi technology has been used as a specific, efficient and simple gene function research method to solve these problems. Hope. This study first tried to establish a gene function based on RNAi technology in Penicillium marneffei. The Rho GTPase (Rho GTPase) may play an important role in controlling the growth and development of the cell. In this paper, the Rho GTPase activation factor is used to study the RhoGTPase in the mold of Penicillium marneffei. The function of se is that Xylp is used as a promoter, and the positive and negative two-way sequence of the target gene is separated from the 550 bpGUS sequence by the carrier PCB309A-XR. GT, silencing target gene. Transformed by Agrobacterium-mediated transformation of Penicillium marneffei with bleomycin as resistance marker The results showed that the growth of Penicillium marneffei was inhibited after the gene interference of the RhoGTPase activation factor, and the colony became smaller, which was similar to that of the wild type. The gene m was also detected by RT-PCR, as compared to the occurrence of a significant change. In view of the important role of Rho GTPase in the organism and the establishment of the silencing system of the transcription gene, we have an interest in the reduction of the RNA level. A preliminary study of the function of the gene is carried out. It is assumed that the gene is formed in the form of the colony of Penicillium marneffei. This is the first successful application of RNAi to study the important gene function in Penicillium marneffei by Agrobacterium-mediated transformation. In order to study the pathogenesis of Rho GTPase in Penicillium marneffei The role of the mechanism provides technical means, and is also a large-scale study of the Mal.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R379

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本文編號：2509859