【摘要】：大腸桿菌O157:H7作為食源性致病菌存在流行暴發(fā)的可能性和感染的嚴(yán)重性,急需研制一種快速準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。本課題根據(jù)石英晶體微天平良好的質(zhì)量響應(yīng)特性,在QCM石英金電極表面采用四種不同的抗體固定方法,將抗體固定在電極表面,并通過(guò)兩種分析方法來(lái)檢測(cè)大腸桿菌O157:H7。根據(jù)不同濃度的菌體溶液響應(yīng)值存在規(guī)律性來(lái)測(cè)定菌體濃度。建立了基于QCM的壓電免疫生物傳感器的微生物檢測(cè)系統(tǒng),能夠快速準(zhǔn)確的檢測(cè)大腸桿菌O157:H7。 本課題的主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下: 1.采用四種抗體固定方法:硅烷固定法,聚乙烯亞胺固定法,3-巰基丙酸固定法和蛋白A固定法等將抗體固定于金電極表面,并通過(guò)兩種分析方法:氣相分析法和流動(dòng)注射法來(lái)跟蹤了解石英金電極表面每一步反應(yīng)的頻率變化。結(jié)果表明,蛋白A固定法與流動(dòng)注射法聯(lián)合使用是最佳的QCM檢測(cè)大腸桿菌O157:H7方法。 2.利用蛋白A固定法和流動(dòng)注射法聯(lián)合使用時(shí),蛋白A濃度和抗體的濃度對(duì)結(jié)果有影響,實(shí)驗(yàn)證明蛋白A最佳濃度為0.5mg/mL,抗體最佳濃度為1.0mg/mL。 3.選擇最佳的抗體固定方法和分析方法,通過(guò)頻率變化量的差異對(duì)不同濃度的大腸桿菌O157:H7溶液進(jìn)行定量檢測(cè),檢測(cè)限為7.33×10~3CFU/mL,檢測(cè)范圍為7.33×10~3CFU/mL～7.33×10~8CFU/mL,在此范圍內(nèi),其頻率變化值和濃度的響應(yīng)方程式為:△f=6.9LogC-10.5。 以上實(shí)驗(yàn)研究,為今后壓電免疫生物傳感器在食品致病菌的檢測(cè)研究應(yīng)用打下基礎(chǔ),為從事食品安全研究與檢測(cè)提供相應(yīng)的技術(shù)支撐。
[Abstract]:As the possibility of epidemic outbreak of food-borne pathogenic bacteria and the severity of infection, it is urgent to develop a rapid and accurate detection method of Escherichia coli O157:H7. According to the good quality response characteristics of quartz crystal microbalance, four different antibody fixation methods were used on the surface of QCM quartz gold electrode to fix the antibody on the electrode surface, and the E. coli O157 鈮，

本文編號(hào)：2508992