【摘要】：目的探討在T系急性白血病的Jurkat細胞中,GPI類錨固蛋白CD59通過LAT介導(dǎo)的細胞增殖、活化、凋亡等相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng),研究GPI錨固類膜蛋白分子對細胞調(diào)控的作用方式。方法分別構(gòu)建LAT-EGFP、neg-EGFP融合蛋白慢病毒載體,轉(zhuǎn)染Jurkat細胞,建立穩(wěn)定表達株(LAT-EGFP作為實驗組,neg-EGFP轉(zhuǎn)染空病毒組作為對照組)。利用CD59單克隆抗體刺激實驗組及對照組細胞后,通過CCK-8檢測細胞的增殖活性,利用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡狀況,并通過激光共聚焦顯微鏡觀察LAT與CD59分子在細胞中的定位表達。最后利用免疫印跡技術(shù)檢測細胞內(nèi)相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的表達情況。結(jié)果 CD59單抗交聯(lián)刺激后,細胞增殖活性增加。實驗組細胞出現(xiàn)明顯晚期凋亡甚至壞死現(xiàn)象。而免疫熒光顯示LAT-EGFP組細胞中LAT分子高亮聚集于脂筏區(qū),相較于對照組細胞呈現(xiàn)明顯的戒指環(huán)狀。Western blot顯示,CD59抗體交聯(lián)后,ZAP70、Fyn、LCK的表達均下降且LATEGFP組蛋白表達量低于對照組。結(jié)論 GPI錨固蛋白CD59通過T細胞活化連接蛋白LAT對T細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)揮正向調(diào)控作用,轉(zhuǎn)染LAT-EGFP的Jurkat細胞處于活化狀態(tài),LAT呈戒指環(huán)狀定位于脂筏。
[Abstract]:Objective to investigate the biological effects of GPI anchoring protein CD59 on cell proliferation, activation and apoptosis mediated by LAT in Jurkat cells of T line acute leukemia, and to study the regulation of GPI anchoring membrane protein molecules on cells. Methods LAT-EGFP,neg-EGFP fusion protein lentivirus vector was constructed and transformed into Jurkat cells, and a stable expression strain was established (LAT-EGFP as experimental group and neg-EGFP transgenic empty virus group as control group). After stimulating the cells of the experimental group and the control group with CD59 monoclonal antibody, the proliferation activity of the cells was detected by CCK-8, and the apoptosis was detected by flow cytometry. The localization and expression of LAT and CD59 molecules in cells were observed by laser confocal microscope. Finally, the expression of intracellular signal transduction proteins was detected by immunoblotting. Results after cross-linking stimulation of CD59 monoclonal antibody, the cell proliferation activity increased. In the experimental group, the cells in the experimental group showed obvious apoptosis and even necrosis in the late stage. Immunofluorescence showed that the LAT molecules in the LAT-EGFP group were highlighted in the raft area, which was significantly higher than that in the control group. Western blot showed that after the CD59 antibody was crosslinked, ZAP70,Fyn, was found to be the most prominent ring in the cells of the control group. Western blot showed that the ZAP70,Fyn, antibody was crosslinked. The expression of LCK decreased and the expression of LATEGFP histone was lower than that of the control group. Conclusion GPI anchoring protein CD59 plays a positive role in T cell signal transduction through T cell activated junction protein LAT. Jurkat cells transfected with LAT-EGFP are activated and LAT is located in lipid raft with ring.
【作者單位】： 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81273206)
【分類號】：R392.12

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本文編號：2496709