【摘要】：目的建立大鼠心肌微血管內(nèi)皮細胞(CMECs)缺氧模型。方法植塊法培養(yǎng)CMECs,免疫細胞化學(xué)鑒定微血管內(nèi)皮細胞特異性標(biāo)志。將原代培養(yǎng)的CMECs在1%O2-94%N2-5%CO2低氧氣體環(huán)境中培養(yǎng)24h制備低氧損傷模型(L組),以無血清常氧培養(yǎng)作為對照組(N組)。倒置相差顯微鏡觀察缺氧前后細胞形態(tài)變化,MTT法測定細胞活力,Annexin V-FITC和PI雙標(biāo)記法測定細胞凋亡率。結(jié)果植塊法培養(yǎng)的大鼠CMECs具備典型微血管內(nèi)皮細胞特征;Ⅷ因子、CD31相關(guān)抗原免疫染色鑒定均陽性。缺氧前后細胞形態(tài)無明顯變化;與N組比較,L組細胞活力明顯增加(P0.05);細胞凋亡率明顯降低(P0.05),其中早期凋亡降低最明顯(P0.01)。結(jié)論本方法可以成功建立簡便、易行的CMECs細胞缺氧模型。
[Abstract]:Objective to establish a rat model of (CMECs) hypoxia in myocardial microvascular endothelial cells. Methods the specific markers of microvascular endothelial cells were identified by CMECs, immunocytochemistry. The hypoxia injury model (group L) was established by culture of primary cultured CMECs in 1%O2-94%N2-5%CO2 anoxic gas environment for 24 h, and serum-free normoxic culture was used as control group (N group). The morphological changes of cells before and after hypoxia were observed by inverted phase contrast microscope, the cell vitality was measured by MTT assay, and the apoptosis rate was measured by Annexin V-FITC and PI double labeling. Results the rat CMECs cultured by block method had the characteristics of typical microvascular endothelial cells, and all of them were positive by immunostaining of factor VIII and CD31 related antigen. There was no significant change in cell morphology before and after hypoxia. Compared with group N, the activity of cells in group L was significantly increased (P 0.05), and the apoptosis rate was significantly decreased (P 0.05), especially in the early stage of apoptosis (P 0.01). Conclusion this method can successfully establish a simple and feasible hypoxia model of CMECs cells.
【作者單位】： 山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院;山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81173441)
【分類號】：R-332

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本文編號：2481038