【摘要】：目的建立大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞(CMECs)缺氧模型。方法植塊法培養(yǎng)CMECs,免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定微血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志。將原代培養(yǎng)的CMECs在1%O2-94%N2-5%CO2低氧氣體環(huán)境中培養(yǎng)24h制備低氧損傷模型(L組),以無血清常氧培養(yǎng)作為對(duì)照組(N組)。倒置相差顯微鏡觀察缺氧前后細(xì)胞形態(tài)變化,MTT法測定細(xì)胞活力,Annexin V-FITC和PI雙標(biāo)記法測定細(xì)胞凋亡率。結(jié)果植塊法培養(yǎng)的大鼠CMECs具備典型微血管內(nèi)皮細(xì)胞特征;Ⅷ因子、CD31相關(guān)抗原免疫染色鑒定均陽性。缺氧前后細(xì)胞形態(tài)無明顯變化;與N組比較,L組細(xì)胞活力明顯增加(P0.05);細(xì)胞凋亡率明顯降低(P0.05),其中早期凋亡降低最明顯(P0.01)。結(jié)論本方法可以成功建立簡便、易行的CMECs細(xì)胞缺氧模型。
[Abstract]:Objective to establish a rat model of (CMECs) hypoxia in myocardial microvascular endothelial cells. Methods the specific markers of microvascular endothelial cells were identified by CMECs, immunocytochemistry. The hypoxia injury model (group L) was established by culture of primary cultured CMECs in 1%O2-94%N2-5%CO2 anoxic gas environment for 24 h, and serum-free normoxic culture was used as control group (N group). The morphological changes of cells before and after hypoxia were observed by inverted phase contrast microscope, the cell vitality was measured by MTT assay, and the apoptosis rate was measured by Annexin V-FITC and PI double labeling. Results the rat CMECs cultured by block method had the characteristics of typical microvascular endothelial cells, and all of them were positive by immunostaining of factor VIII and CD31 related antigen. There was no significant change in cell morphology before and after hypoxia. Compared with group N, the activity of cells in group L was significantly increased (P 0.05), and the apoptosis rate was significantly decreased (P 0.05), especially in the early stage of apoptosis (P 0.01). Conclusion this method can successfully establish a simple and feasible hypoxia model of CMECs cells.
【作者單位】： 山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院;山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81173441)
【分類號(hào)】：R-332

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3 邵東風(fēng);柯薩奇B_3病毒對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞骨架、緊密連接和通透性的影響及p38MAPK的調(diào)控作用[D];山東大學(xué);2006年

4 王鈺;NSCs缺氧模型的建立以及鋰對(duì)缺氧NSCs的修復(fù)作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

5 郝媛媛;17β-雌二醇對(duì)大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的促血管新生作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 馬文帥;白藜蘆醇對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

7 兌宏志;鹽酸戊乙奎醚對(duì)大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后凋亡的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

8 趙蓓;辛伐他汀對(duì)糖基化終產(chǎn)物誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)MCP-１和ICAM-1的影響及機(jī)制探討[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 關(guān)愛麗;血管緊張素Ⅱ引起心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及其可能機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 薛慧艷;羥基紅花黃色素A對(duì)缺氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2481038