【摘要】：目的 建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2分子單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；研究抗體的生物學(xué)特性及功能；建立人可溶性B7-2分子的ELISA檢測(cè)方法。 方法 應(yīng)用B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)建立分泌抗人B7-2單抗的雜交瘤細(xì)胞株；快速定性試紙法鑒定單抗的亞類；體內(nèi)誘生腹水法制備單抗；免疫親和層析法純化抗體；間接免疫熒光法分析單抗對(duì)細(xì)胞膜型B7-2分子的識(shí)別；MTT法檢測(cè)單抗對(duì)Daudi的生長(zhǎng)抑制和對(duì)PBTCs增殖的抑制作用；競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)分析單抗識(shí)別的抗原位點(diǎn)。生物素標(biāo)記抗體后建立可溶性B7-2分子的ELISA檢測(cè)方法。 結(jié)果 獲取一株穩(wěn)定分泌抗人B7-2分子單抗的雜交瘤，命名為6A5；快速定性試紙法鑒定6A5屬小鼠IgG1亞類及κ型；經(jīng)體內(nèi)誘生腹水法制備單抗，小鼠腹水形成的陽性率約為80％，腹水的收獲量平均為5.9ml／只小鼠；經(jīng)免疫親和層析法純化，腹水中抗體蛋白的得率為1.1mg／ml；單抗6A5與L929-B7-2、PBTCs、Raji、MCF-7和Daudi的陽性結(jié)合率分別為99.9％、4.6％、90.6％、79.6％和99.1％；將6A5(終濃度為5μg／ml)加入到Daudi細(xì)胞的培養(yǎng)體系中，，經(jīng)顯微鏡觀察及MTT法分析，6A5對(duì)Daudi細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用。以絲裂霉素處理的L929-B7-2為刺激細(xì)胞，PBTCs為反應(yīng)細(xì)胞，加入6A5共同培養(yǎng)；經(jīng)MTT法分析，6A5能阻斷B7-2介導(dǎo)的協(xié)同刺激信號(hào)，抑制PBTCs增殖；通過Biotin標(biāo)記B7-2單抗，建立了人sB7-2分子的ELISA檢測(cè)方法，能夠?qū)ρ鍢?biāo)本及細(xì)胞裂解液中的sB7-2進(jìn)行定量分析。 結(jié)論 本研究獲取的功能性B7-2單抗及建立的sB7-2的檢測(cè)方法在該分子的基礎(chǔ)和應(yīng)
[Abstract]:Objective to establish a hybridoma cell line stably secreting monoclonal antibody against human B7 鈮

本文編號(hào)：2479613