發(fā)布時間：2019-05-07 05:34

【摘要】：乙型腦炎病毒(Japancse encephlitic virus,JEV)和西尼羅病毒(West Nile Virus, WNV)同屬于蟲媒病毒黃病毒科,黃病毒屬、乙型腦炎病毒抗原復(fù)合組(Japanese Encephalitis Virus Serocomplex Group)的成員。該復(fù)合組成員病毒屬于蚊媒病毒,主要由鳥類攜帶,經(jīng)蚊蟲傳播給人,也可以感染其它哺乳動物,引起多種臨床癥狀,包括發(fā)熱,甚至腦炎及腦膜炎,重者可致死。近年來,該組成員中的西尼羅病毒流行已經(jīng)給人類的健康造成嚴(yán)重的損害和威脅。國外將西尼羅熱歸于新發(fā)傳染病(emerging infectious disease)范疇,我國國家衛(wèi)生部將西尼羅熱歸于可能傳入的新發(fā)傳染病。早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防WNV的傳播是控制西尼羅熱爆發(fā)流行的主要措施,檢測蚊蟲體內(nèi)的WNV感染率是西尼羅病毒傳播預(yù)警的一個直觀指標(biāo)。從人員和設(shè)備需求來看,快速免疫檢測方法具有明顯的優(yōu)勢。 黃病毒是正鏈RNA病毒。以西尼羅病毒為例,它由10962個核苷酸組成,其開放讀碼框編碼病毒3種結(jié)構(gòu)蛋白和7種非結(jié)構(gòu)蛋白。其中包膜蛋白(E)和膜蛋白(M)是病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白,可能與病毒的毒力及侵襲性有關(guān),也是病毒的主要抗原。但是,由于黃病毒屬成員間在病毒表面尤其是E蛋白上存在許多共同的抗原表位,所以在血清學(xué)檢測時容易出現(xiàn)交叉反應(yīng),使反應(yīng)結(jié)果特異性不高。文獻(xiàn)報道,針對登革病毒M蛋白的前體prM蛋白的單克隆抗體與乙腦病毒抗血清無交叉反應(yīng),提示在prM蛋白上可能存在病毒特異性抗原表位。為了探索高效、靈敏的檢測WNV方法,本研究分別克隆了JEV和WNVprM基因,并原核表達(dá),制備分別針對JEV和WNVprM蛋白的特異性單克隆抗體,用于JEV復(fù)合組成員感染的鑒定、鑒別診斷和流行病學(xué)研究。 首先,本研究采用JEV疫苗株免疫BALB/c小鼠,制備單克隆抗體,經(jīng)過五次亞克隆篩選,獲得分泌針對JEV疫苗株的單抗的雜交瘤細(xì)胞株V6B9,抗體亞型為IgG1,抗體滴度為10~5。ELISA、Western Blot和免疫組化檢測結(jié)果證實(shí)該株單抗能夠與JEV感染鼠腦上清中的病毒,以及與WNV反應(yīng)。該抗體可用于JEV復(fù)合組病
[Abstract]:Japanese Encephalitis virus (Japancse encephlitic virus,JEV) and West Nile virus (West Nile Virus, WNV) are both members of (Japanese Encephalitis Virus Serocomplex Group), which belong to the Genus Flavor virus, Genus Flavor virus and Japanese Encephalitis virus Antigen complex group. This composite group of members of the virus is a mosquito-borne virus, mainly carried by birds, transmitted by mosquitoes to humans, but also can infect other mammals, causing a variety of clinical symptoms, including fever, and even encephalitis and meningitis, serious people can die. In recent years, the West Nile virus epidemic among the members of the group has caused serious damage and threat to human health. West Nile fever has been classified as a new infectious disease in foreign countries, and the Ministry of Health of our country has classified West Nile fever as a new infectious disease which may be introduced into China. Early detection and prevention of WNV transmission are the main measures to control the outbreak of West Nile fever. Detection of WNV infection rate in mosquitoes is an intuitive indicator for early warning of West Nile virus transmission. From the personnel and equipment requirements, the rapid immune detection method has obvious advantages. Yellow virus is a positive-stranded RNA virus. Taking West Nile virus as an example, it consists of 10962 nucleotides, and its open reading frame encodes three structural proteins and seven non-structural proteins of the virus. The envelope protein (E) and membrane protein (M) are the main structural proteins of the virus, which may be related to the virulence and invasiveness of the virus, and are also the main antigens of the virus. However, because there are many common antigenic epitopes on the surface of the virus, especially on the E protein, there are many common antigenic epitopes among the members of the genus flavivirus, so it is easy to appear cross-reaction in serological detection, which makes the reaction result less specific. It has been reported that monoclonal antibodies against the precursor prM protein of dengue virus M protein did not cross-react with Japanese encephalitis virus antiserum, suggesting that there may be virus specific epitopes on the prM protein. In order to explore an efficient and sensitive method for the detection of WNV, JEV and WNVprM genes were cloned and expressed in E. coli to prepare specific monoclonal antibodies against JEV and WNVprM proteins, respectively, for identification of the infection of JEV complex group members. Differential diagnosis and epidemiological study. Firstly, monoclonal antibodies were prepared by immunizing BALB/c mice with JEV vaccine strain. After five subclones screening, hybridoma cell line V6B9 secreting monoclonal antibody against JEV vaccine strain V6B9 was obtained. The antibody subtype was IgG1, antibody titer of 10? The results of Western Blot and immunohistochemistry showed that the monoclonal antibody could react with the virus in the supernatant of the brain infected with JEV and with WNV. The antibody can be used in JEV complex group.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2470808