【摘要】： 目的:從胎盤(pán)組織中分離培養(yǎng)獲得間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)已成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)。MSCs在胎盤(pán)的分布并不均衡,如何取材直接影響到胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞(placenta derived mesenchymal stem cells,PMSCs)在體外的有效獲取及擴(kuò)增。目前尚無(wú)特異性的標(biāo)記物可用于成體MSCs的識(shí)別。本實(shí)驗(yàn)旨在利用一些通用的MSCs標(biāo)記物,探索MSCs在人胎盤(pán)的分布規(guī)律,并在此基礎(chǔ)上通過(guò)分組分離培養(yǎng)PMSCs,觀察細(xì)胞生物學(xué)的特性,初步驗(yàn)證其規(guī)律,為MSCs的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用奠定良好的基礎(chǔ)。 方法:取無(wú)指征剖宮產(chǎn)之足月健康產(chǎn)婦的新鮮胎盤(pán)組織,按中央帶(A)、中間帶(B)和邊緣帶(C)、絨毛板層(a)、中間層(b)和基底板層(c)分為九組:Aa、Ab、Ac、Ba、Bb、Bc、Ca、Cb、Cc,連續(xù)切片,以CD166、CD44、CD29分別做免疫熒光和免疫組化染色。顯微鏡下觀察陽(yáng)性細(xì)胞分布區(qū)域,采用HPIAS-1000彩色病理圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象分析,檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞區(qū)域的光密度值(OD),以平均光密度值作為衡量表達(dá)強(qiáng)弱的標(biāo)準(zhǔn)。所測(cè)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行分析。再按上述分組取材分離培養(yǎng)PMSCs,觀察各組細(xì)胞增殖情況有無(wú)差異,進(jìn)一步驗(yàn)證上述標(biāo)記物定位的可靠性;同時(shí)檢測(cè)所培養(yǎng)細(xì)胞的表面抗原,誘導(dǎo)傳代后的細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化,證實(shí)其具有MSCs的特點(diǎn)。 結(jié)果:(1)首次證實(shí)3個(gè)標(biāo)記物CD166、CD44、CD29陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞的分布情況較一致,主要集中于血管內(nèi)皮下及血管附近間質(zhì)內(nèi),胎盤(pán)中央帶中間層(Ab)陽(yáng)性細(xì)胞較集中,陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度較強(qiáng),其OD值與其它組相比差異有顯著性(P0.05),邊緣帶陽(yáng)性細(xì)胞稀少,陽(yáng)性表達(dá)的強(qiáng)度較弱;(2)分組分離培養(yǎng)PMSCs結(jié)果顯示:在相同處理方法下和相同條件培養(yǎng)基中,各組間細(xì)胞增殖情況有差異,其中Ab組生長(zhǎng)速率和細(xì)胞數(shù)量的增加較其它組顯著;(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面抗原表明,培養(yǎng)所獲細(xì)胞表達(dá)CD166、CD44、CD29、CD105,而不表達(dá)CD45、CD34以及HLA-DR,提示呈MSCs表型;(4)向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)果表明,培養(yǎng)細(xì)胞有MSCs跨胚層分化的潛能。 結(jié)論:胎盤(pán)各部位均存在CD166、CD44、CD29陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞,但臍帶附著處下方胎盤(pán)中間層(Ab)相對(duì)其他部位而言可能為MSCs富集區(qū)域。各組MSCs的數(shù)量與MSCs的體外分離培養(yǎng)效率呈正相關(guān)。CD166、CD44和CD29作為成體MSCs的定位指標(biāo)有較好的可信度。
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【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2469178