發(fā)布時間：2019-02-20 18:45

【摘要】：目的 研究妊娠水平E2以體內(nèi)給藥或/及體外給藥方式對正常小鼠脾細胞和免疫小鼠脾細胞活化的調(diào)節(jié)作用,探討其在細胞接觸依賴性調(diào)控水平和細胞因子依賴性調(diào)控水平上對T細胞活化與分化的調(diào)節(jié)機制。 方法 皮下注射BSA和弗氏完全佐劑免疫Balb/c小鼠。間接ELISA法用于檢測小鼠血清BSA特異性IgG抗體;MTT試驗用于檢測小鼠脾細胞增生水平;RT-PCR技術(shù)用于CTLA-4、B7-1、B7-2、IFN-γ、IL-2、IL-12p40、IL-4、IL-10、TGF-β的基因轉(zhuǎn)錄水平;雙抗體夾心ELISA法檢測脾細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、IL-4的蛋白表達水平。 結(jié)果 未觀察到E2對BSA特異性IgG的生成有明顯的調(diào)節(jié)作用。E2促進正常小鼠脾細胞增生,抑制免疫小鼠脾細胞增生。E2抑制正常小鼠脾細胞CTLA-4、B7-1的基因轉(zhuǎn)錄,促進B7-2基因轉(zhuǎn)錄;促進免疫小鼠脾細胞CTLA-4基因轉(zhuǎn)錄,不影響B(tài)7-1、B7-2基因轉(zhuǎn)錄。E2促進正常小鼠脾細胞IFN-γ的基因表達和蛋白表達水平,促進IL-2、IL-12p40基因轉(zhuǎn)錄,抑制IL-4的基因表達和蛋白表達水平,抑制TGF-β基因轉(zhuǎn)錄。E2對免疫小鼠脾細胞表達細胞因子的調(diào)節(jié)作用與其作用方式有關(guān)。體外E2作用不影響IFN-γ的基因表達和蛋白表達水平,不影響IL-2、IL-12p40、TGF-β基因轉(zhuǎn)錄,促進IL-4的基因表達和蛋白表達水平,促進IL-10基因轉(zhuǎn)錄;體內(nèi)E2作用促進IL-12p40、TGF-β基因轉(zhuǎn)錄,對IL-4、IL-10基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)與體外E2作用相同;體內(nèi)聯(lián)合體外E2作用促進IFN-γ的基因表達和蛋白表達水平,對IL-12p40、TGF-β、IL-4、IL-10基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)作用與單純體外、體內(nèi)E2作用相同。 結(jié)論 妊娠水平的E2對正常和免疫小鼠脾細胞的活化具有不同的調(diào)節(jié)作用,主要表現(xiàn)在脾細胞增生、協(xié)同刺激分子及其配體基因的表達、細胞因子基因
[Abstract]:Objective to study the effects of estradiol (E _ 2) on the activation of spleen cells in normal mice and immunized mice in vivo and / or in vitro. To investigate the mechanism of T cell activation and differentiation at the level of cell contact dependent regulation and cytokine dependent regulation. Methods Balb/c mice were immunized with BSA and Freund's complete adjuvant subcutaneously. Indirect ELISA assay was used to detect BSA specific IgG antibody in serum and MTT test was used to detect the proliferation of spleen cells in mice. RT-PCR technique was applied to the gene transcription level of CTLA-4,B7-1,B7-2,IFN- 緯, IL-2,IL-12p40,IL-4,IL-10,TGF- 尾. The expression of IFN- 緯 and IL-4 in the culture supernatant of splenocytes was detected by double antibody sandwich ELISA method. Results there was no obvious effect of E2 on the production of BSA specific IgG. E2 promoted the proliferation of spleen cells in normal mice and inhibited the proliferation of splenocytes in immunized mice. E2 inhibited the transcription of CTLA-4,B7-1 gene in normal mice spleen cells. Promote the transcription of B7-2 gene; To promote CTLA-4 gene transcription in spleen cells of immunized mice, but not to affect the transcription of B7-1B7-2 gene. E2 promoted the gene expression and protein expression of IFN- 緯 in normal mouse spleen cells, and promoted the transcription of IL-2,IL-12p40 gene. The gene expression and protein expression of IL-4 were inhibited and the transcription of TGF- 尾 gene was inhibited. The regulation of E2 on cytokines expression in spleen cells of immunized mice was related to its mechanism of action. E2 did not affect the gene expression and protein expression of IFN- 緯 in vitro, did not affect the transcription of IL-2,IL-12p40,TGF- 尾 gene, promoted the gene expression and protein expression of IL-4, and promoted the transcription of IL-10 gene. In vivo, E2 promoted IL-12p40,TGF- 尾 gene transcription, and the regulation of IL-4,IL-10 gene transcription was the same as that of in vitro E2. In vivo and in vitro, E2 promoted the gene expression and protein expression of IFN- 緯. The effect of E2 on the transcription of IL-12p40,TGF- 尾 and IL-4,IL-10 genes was the same as that in vitro. Conclusion E _ 2 at pregnancy level has different effects on the activation of splenocytes in normal and immunized mice, mainly in the proliferation of spleen cells, the expression of co-stimulatory molecules and their ligand genes, cytokine genes.
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R714;R392

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本文編號：2427146