【摘要】：目的構(gòu)建人乳頭瘤病毒11型(HPV11)L1原核表達(dá)系統(tǒng)pBAD(B)鄄HPV11L1,表達(dá)HPVL1蛋白,為進(jìn)一步制備基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。方法PCR法從尖銳濕疣組織標(biāo)本中擴(kuò)增人乳頭瘤病毒11型L1基因片段,克隆至pBluescript質(zhì)粒,并測序。將其從克隆重組質(zhì)粒中切下連入表達(dá)載體,建立pBAD(B)鄄HPV11L1原核表達(dá)重組質(zhì)粒,在大腸桿菌宿主菌Top10中,經(jīng)阿拉伯糖誘導(dǎo),表達(dá)融合蛋白L1,經(jīng)SDS鄄PAGE電泳和Westernblot進(jìn)行鑒定。結(jié)果3株HPV11L1經(jīng)測序發(fā)現(xiàn)變異一致,每株均有2個(gè)核苷酸變異,但未影響氨基酸變化。經(jīng)SDS鄄PAGE鑒定L1蛋白相對分子質(zhì)量為59×103,與預(yù)期值相同,Westernblot證明表達(dá)蛋白能與單克隆抗體反應(yīng),成功構(gòu)建了pBAD(B)鄄HPV11L1原核表達(dá)系統(tǒng)。結(jié)論所構(gòu)建的pBAD(B)鄄HPV11L1原核表達(dá)系統(tǒng)能夠高效表達(dá)HPV11L1蛋白。
[Abstract]:Objective to construct a prokaryotic expression system of human papillomavirus type 11 (HPV11) L1 pBAD (B)-HPV11L1, to express HPVL1 protein. Methods Human papillomavirus type 11 L1 gene was amplified from condyloma acuminatum tissue by PCR and cloned into pBluescript plasmid and sequenced. The recombinant plasmid was digested from the cloned recombinant plasmid and inserted into the expression vector. PBAD (B) HPV11L1 prokaryotic expression plasmid was established. The fusion protein L1 was induced by arabinose in Escherichia coli Top10 and identified by SDS PAGE electrophoresis and Westernblot. Results the three HPV11L1 strains showed the same variation by sequencing. Each strain had 2 nucleotide variations, but had no effect on the change of amino acids. The relative molecular weight of L1 protein identified by SDS PAGE was 59 脳 103, which was the same as the expected value. Westernblot proved that the expressed protein could react with monoclonal antibody and successfully constructed the pBAD (B) HPV11L1 prokaryotic expression system. Conclusion the constructed pBAD (B)-HPV11L1 prokaryotic expression system can efficiently express HPV11L1 protein.
【作者單位】： 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室 第一臨床醫(yī)學(xué)院皮膚科 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室
【基金】：黑龍江省科技攻關(guān)項(xiàng)目資助(GB02c111) 黑龍江省青年基金(QC03C04)
【分類號】：R346

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2414009